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PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍ppt课件.ppt


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文档列表 文档介绍
PCR引物设计及相关软件使用
主要内容
PCR介绍
引物设计原理
引物设计的优化原则
Primer Premier 介绍
举例说明引物的设计
PCR介绍
1、什么是PCR
2、PCR的组成
3、如何提高PCR成功率
(定量,对照)
引物设计原理
引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。引物设计总体上包含三个程序:序列下载,同源性比较,引物设计筛选。
引物设计的原则
1、引物长度
大多数应用的最短引物长度为18个核苷酸。如果期待的产物长度等于或小于500 bp,选用短的(16~18)的引物;若产物长5 kb,则用24个核苷酸的引
物。有人用20~23个核苷酸引物得到40 kb的产物。
引物设计的原则
4、引物3’端
引物3’末端和模板的碱基完全配对
防止一对引物内的同源性
考虑末端5个碱基的ΔG
引物3′端要避开密码子的第3位
引物设计的原则
5、引物序列与模板序列组成的相似性
可能的错误引发位点决定于引物序列组成与模板序列组成的相似性,相似性高则错误引发率高。

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  • 时间2018-10-08