十六-PAS和Feulgen染色.ppt

组织化学实验
实验十五、小鼠肝糖原染色——PAS反应
实验十六、小鼠肝/肠核酸染色——Feulgen反应
实验目的
(Periodic Acid-Schiff stain)的基本原理,掌握PAS染色法的技术方法及其应用。
,掌握孚尔根染色法的技术方法及其应用。
小鼠肝糖原染色——PAS反应
糖原是由多个葡萄糖组成的带分枝的大分子多糖,形状为大小不等的颗粒,遇碘则变褐色,易溶于水。
动物细胞内贮存的多糖,完全由葡萄糖组成。在动物体内以肝脏和骨骼肌中储量最丰富,与淀粉在植物中的作用相当。
肝糖原分解主要维持血糖浓度,肌糖原分解为肌肉自身收缩供给能量。
利用强氧化剂使多糖产生游离的醛基,醛基和Schiff试剂结合,形成紫红色的化合物。因此在有多糖的部位,就会呈现除紫红色阳性反应。
PAS (Periodic Acid Schiff )
反应的基本原理
,时时摇动玻璃瓶,煮沸5min使之充分溶解,冷却至50℃时过滤,加入10ml 1M HCl,冷至25℃时,(Na2S2O3)或无水亚硫酸(NaHSO3),在室温冷暗处至少放置24h(有时需2~3天),使其颜色退至淡黄色,密封瓶口,藏于暗处,最好保存于4℃冰箱中(可保存数月或更长时间)。, 摇1min, 用粗滤纸过滤,滤液应为无色;若液体颜色变为粉红色,便不能再用。
Schiff氏试剂的制备
PAS反应的应用
可用于证明与鉴别细胞内空泡状的性质,心肌病变及其他心血管疾病的诊断,糖原累积病诊断和研究,糖尿病的诊断和研究,用于某些肿瘤的诊断等。在临床诊断、分类和治疗具有重要的意义。
1) 组织切片(70%酒精中),鸭血涂片
2) 过碘酸液
3) Schiff氏液
4) %偏重亚硫酸盐溶液
5) 苏木精染色液
实验材料
1. 将石蜡切片(已保存于70%酒精中)移入50%酒精复水5 min
,1 min;
3. 过碘酸液处10 min (对照实验用蒸馏水浸泡);
4. 蒸馏水洗1次,2 min;
5. Schiff 试剂中放置 20 min;
6. 亚硫酸盐溶液浸洗,3次, 每次2 min;
7. 流水冲洗5 min(避免流水直接冲洗有组织的部位), 蒸馏水过一下;
8. 用苏木精复染细胞核10 min ;
9. 流水冲洗5 min (避免流水直接冲洗有组织的部位),蒸馏水浸泡1 min,吸干;
10. 甘油封片;
11. 显微镜观察。
实验步骤( PAS反应)
结果分析
PAS阳性呈不同程度的紫红色,细胞核蓝色。