生物化学实验五 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定.doc

实验五酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
一、目的要求
学习和掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法;了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、实验原理
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。
三、器材与试剂
1〉材料
酵母粉。
2〉器材
乳钵、150ml锥形瓶、水浴锅、量筒、吸管、洗耳球、漏斗、滴管、试管、试管架、烧杯、离心机、滤纸、试管夹。
3〉试剂
(1)。
(2)酸性乙醇溶液:。
(3)95%乙醇。
(4)乙醚。
(5)。
(6)浓氨水。
(7)。
(8)三氧化铁-浓盐酸溶液:将2ml 10%三氧化铁溶液(用FeCl3·6H2O配制)加入到400ml浓盐酸中。
(9)苔黑酚乙醇溶液:溶解6g苔黑酚于100ml 95%乙醇中。
(10)定磷试剂。
%硫酸溶液:将17ml浓硫酸()缓缓加入到83ml水中。
%钼酸铵溶液:。
%抗坏血酸:将10g抗坏血酸溶于100ml水中,储于棕色瓶保存。溶液呈淡黄色时可用,如呈深黄色或棕色则失效。
临用时将上述3种溶液与水按比例混合:17%硫酸溶液︰%钼酸铵溶液︰10%抗坏血酸︰水=1︰1︰1︰2(体积分数)。
四、实验步骤
1〉RNA提取
将10g酵母悬浮于90ml ,并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150ml锥形瓶中。在沸水浴上加热30min后,冷却。(3000r/min)离心10分钟,将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后,(3000r/min)离心5分钟。弃去上清液。用95%乙醇洗涤沉淀两次,每次10ml。乙醚洗涤沉淀一次后,再用乙醚