精品论文-mMIP-1α-DT390重组免疫毒素治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究.pdf

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二0 年月
英文缩略词英文缩写自身免疫性疾病氨苄青霉素趋化因子二乙基焦磷酰胺二油酰磷脂酰乙实验性变态反应实验性自身免疫●英文全称中文名称吸光度粘附分子过硫酸铵血脑屏障牛血清白蛋白中枢神经系统二氨基联苯胺二甲亚砜醇胺白喉外毒素二硫苏糖醇性脑脊髓炎◆瓸
性脑脊髓炎酶联免疫吸附试福氏完全佐剂桓扇潘白细胞介素巨噬细胞炎症蛋少突胶质细胞糖●’獀狟Ⅱ一·
聚丙烯酰胺凝胶十二烷基磺酸钠四氮甲基唑蓝烟酰胺腺嘌呤二核苷酸光密度电泳磷酸盐缓冲液聚合酶链式反应假单胞菌外毒素蛋白脂蛋白佛波酯百日咳毒素赴芴赴呙四甲基乙二胺ㄖ赴肿瘤坏死因子●··
狣重组免疫毒素治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究吕梅励张林教授博士生导师中文摘要璓目的系统的炎症性、多发性庵旨膊【哂兄⒆锤丛佣啾洹⒒航庥敫捶◆自身免疫性疾病机体免疫系统针对自身抗原发生免疫应答,产生自身抗体或自身致敏淋巴细胞,造成正常组织损伤而引起的一大类疾病,是公认的人类难治性重大疾病之一。目前临床上缺乏针对匦У闹瘟品桨福2捎酶髦免疫抑制剂治疗庑┲萍粮弊饔么螅岬贾禄迕庖吖δ艿娜琈是一种主要累及中枢神经交替进行、病程迁延不规律等特点,多年来一直困扰着患者。实验性自身免疫性脑脊髓炎是一种由活化赴主要是赴介导的器官特异性自身免疫性疾病,主要病理特征为血管周围炎性细胞浸润和神经脱髓鞘反应,在临床症状、生化指标及病理等方面与具有相似的特征,因此蝗珹怯捎诟髦衷虻贾面抑制。人类多发性硬化●,大学博:貉宦畚吕梅励:刈槊庖叨舅刂瘟菩∈驟的研究
方法为是研究的良好动物模型,也是赴榈嫉钠鞴偬匾煨訟的免疫毒素琁且焕嘟锒舅赜氲枷蛟靥抗体或细胞因子悠鹄垂钩傻脑雍戏肿印5枷蛟靥逵肽承┫赴泶锘过量表达的特异性抗原、糖类结构或细胞因子受体特异结合,携带的毒素分子到达特定的靶细胞,通过抑制蛋白合成或改变信号传递途径杀死靶向性杀伤抗原特异性活化赴闹刈槊庖叨舅兀涂赡芑岽锏皆し珼蛑刈槌梢恢中滦椭刈槊庖叨舅兀菇ㄕ婧吮泶镏粒,质粒经阳离子脂质体包被后,用于治疗冶悠废敌∈蟮腅模ü齊椒ǎ有∈蟾卧嘀谢竦胢猯基因片段:通过构建重组质粒.——恢刈橹柿W;蟪Ω菌秆〕龊姓凡迦肫蔚难粜钥寺。欢灾刈橹柿=●典型代表。靶细胞,同时不影响其它正常细胞的功能。因此,如果能构建一种可以和治疗哪康摹本课题以活化赴特别是赴膜表面高表达的受体的配体巨噬细胞炎症蛋白猯Ⅱ蚱巫魑5枷蚍肿樱氚缀矶舅鼗钚云蜠型。通过观测小鼠临床症状、神经系统病理改变、外周血相关细胞因子水平动态变化、细胞及细胞数量及比例的变化,评估该重组免疫毒素预防和治疗男Ч椒ɡ┰龊蠨基因的质粒获得蚱危唤一及蚱味ㄏ虿迦朐吮泶镏柿四川大学博:宦畚吕梅励:—睤重组免疫毒素治疗小鼠难芯Ⅱ,
结果行限制性内切酶酶切分析和蛄蟹治觯患ㄕ返闹柿W;扩增蚱危缓蠖ㄏ虿迦氲秸婧酥柿校菇ㄖ刈橹柿—.—恢刈橹柿W;蟪杆菌秆〕龊姓凡迦肫蔚难粜钥寺。欢灾刈橹柿脂质体介导法转染细胞,免疫荧光法检测重组毒素的表聚丙烯酰胺凝胶电泳—觳獾鞍椎呐ǘ群痛慷龋航痔嵛镉敫J贤耆艏等量混和,制成油包水的乳小鼠的P汀Mü允笛槎锏闹⒆础⒅惺嗌窬低车牟±改变及相关细胞因子水平的检测,评估P偷墓菇ㄇ榭觥弦徊交竦玫恼婧吮泶镏柿狣经阳离子脂质体包被后,以肌注的方式治疗小鼠P汀9跱鼠的临床症状、脑部病理改变、外周血赴喙叵赴蜃印/赴建重组免疫毒素的原核表达质粒.——组质粒经过适当的限制性内切酶酶切分析及庑蛑な担●。进行限制性内切酶酶切分析和蛄蟹治觯患ㄕ返闹柿S达情况;ú舛╩瓺的生物学活性。褂酶慕腒ù有孪逝<顾柚刑崛粗提物,经剂,同时加入百日咳杆菌菌液,采用腹腔注射的方式诱导赴降谋浠私飧弥刈槊庖叨舅氐闹瘟菩Чü齊ù有∈蟾巫躌中获得了大小的—基因片段;通过椒ɑ竦昧薉基因片段;通过连接构四门『大学博士学位论文吕梅励:..刈槊庖叨舅髦瘟菩∈驟的研究
中,并且目的基因的阅读框架保持不变;—婧吮泶镏柿..狣经过适当的限制性内切酶酶切分析及庑蛑な担琺基因片段正确插入到真核表达质粒中:通过免疫荧光法检测证实:转染真核质粒在细胞中可瞬时表达目的蛋白;ㄖな担合赴H崛〕龅腗蛋白粗提物浓度为小鼠出现了牡湫椭⒆矗圆坎±砬衅允荆捍竽云ぶ适杷桑小脑脑膜下及脑膜血管周围大量馨拖赴蟮雀谋洌P托∈笸庵苎V蠭吖水平明显升高,最高值达到症状评分降低;冰冻切片免疫组织化学检测发现:赴贡泶锝档停琓细胞相关细胞因子一泶镂廾飨愿谋洌流式细胞术分析发现:脾脏细胞赴癟细胞数量均降低;●—及蚱握凡迦氲皆吮泶镏柿及抗亩嗫菇