发酵工程模块—上游实验
贾彩凤
实验目的
进一步理解微生物生产过程的工艺原理,熟悉生产过程。
掌握微生物发酵罐的结构和操作方法。
学习发酵过程中指标的意义及控制,对微生物生产过程有总体的认识。
实验材料
轮枝链霉菌(Streptoverticillium mobaraense);
菌种特性:好氧菌;以无性孢子或菌丝片断进行繁殖;
发酵生产微生物谷氨酰胺转胺酶(MTGase) 。
TG酶的应用
发酵实验流程图
发酵罐和培养基的灭菌
菌种活化
三角瓶扩大培养
发酵罐清洗与检查
斜面菌种
发酵培养基的配制
加入到发酵罐中
接种
取样
发酵罐发酵的同时,用完全相同的条件,在摇瓶中做平行对照实验。
发酵液
冷冻离心,取上清,冰箱保存
超滤
酒精沉淀
SDS-PAGE电泳
粗滤
相关知识介绍
1. 培养基
孢子培养基、种子培养基、发酵培养基
孢子的制备,种子的制备,菌龄,接种量
1
3
2
4
茂原链霉菌生长曲线
相关知识介绍
3. 液体深层培养的几个关键点
灭菌
温度控制
通气和搅拌
相关知识介绍
4. 四联罐介绍
3L 的发酵罐,由罐体、空压机、主机、水源组成。
本实验用的发酵罐
谷氨酰胺转胺酶(MTGase)的发酵
轮枝链霉菌接种量:5~10%(v:v)
培养条件:温度,30℃;搅拌转速为200rpm;通气量,3vvm(通气量与发酵液体积比-VVM);培养时间:40h左右。
监测发酵罐的T、通气量、搅拌转速等状态,按照一定时间取样。
测定发酵液的pH、酶活、甘油含量和生物量。
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