SA-hIL-15双功能分子研制.pdf

üδ芊肿拥难兄�中文摘要中又摘要我们利用生物素化试剂将生物素����化学交联到肿瘤细胞表面蛋白质胞毒活性;工���且恢钟牍ぜ阂�有许多功能重叠的细胞因子,具有明显的抗瘤效应,从��V刑崛���一����柿R约皃��一���一�柿�本室制备���菌,提取包涵体���逑吹硬捎帽臼乙鸦褡ɡ�椒�,镍金属螯合����层析纯化,脉冲和透析的方法进行复性。利用��玃��許�猦���üδ苋诤�蛋白的纯度及物理特性进行鉴定。对�—����üδ苋诤系鞍椎纳�锘钚越��温州医学院硕士学位论文���温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室背景肿瘤疫苗是目前最具吸引力的肿瘤治疗方法。通过基因修饰或细胞表面锚定修饰技术将具有免疫调节作用的细胞因子修饰肿瘤细胞制成新型肿瘤缅脆疫苗,是肿瘤疫苗研究的新策略。的游离氨基上,然后链亲和素�������琒�标记的的细胞因子或/和免疫刺激辅助分子通过链亲和素与生物素的特异强力结合,将细胞因子或/和免疫刺激辅助分子锚定在肿瘤细胞表面,制成新型的肿瘤细胞疫苗。白细胞介素��������,�~��且恢諸细胞生长因子和信号调节分子。研究表明:含����艏恋闹琢鲆呙纾�艽碳��活化的外周血�赴�鲋常�刺激活化的�赴�置诳固澹�俳鳱�赴�鲋澈头置谙赴�蜃樱�銮縉�赴�南�并且综合指数高于�一��为了比较不同构建方向的�/����诤系鞍准浠钚缘牟钜欤�狙芯吭谖沂�已经构建的���一�基础上,构建��猦�一�的原核表达载体,并进行了二者的表达、纯化、复性及体外双功能活性测定,为研带�����砻婷6ㄐ奘蔚男滦�肿瘤细胞疫苗打下了基础。本论文工作主要研究内容包括三部分:������融合基因的克隆及表达。������融合蛋白纯化及其复性研究。�������üδ苋诤系鞍椎某醪郊�ā�方法计引物用��┰龅弥罸���基因片段,酶切获得���籗�咝栽靥澹�菇ǔ�������~�原核表达载体。融合基因间含连接肽,并在�撕����纯化标签。转化大肠杆菌������呕�盏际奔浜虸��ǘ取@┚�嘌�����
小与预期一致的片段。对重组质粒进行��庑颍�峁�隚���收录的�和��/�,活性明显低于���一�融合蛋白。�����诤系鞍拙�艽碳��活化的人外周血淋巴细胞的增殖、且呈剂关键词:融合蛋白;自细胞介素一�;链亲和素;纯化;生物学活性温州医学院硕士学位论文初步研究:检测该融合蛋白对���激的人外周血淋巴细胞的增殖活性;流式细胞仪分析该融合蛋白对生物素化的��瓼�细胞锚定修饰效率。同时,制备了�����双功能融合蛋白,并比较二者的生物活性。结果构建的�—���融合基因表达载体用限制性内切酶进行酶切鉴定,获得大����蛄型耆�恢拢��蚨谅肟蚣苷�贰�表达�����诤系鞍椎拇蟪Ω司鶥����重组体,经表达筛选后得到的最佳诱导时间为�,��的最佳诱导剂量为����/�琒�猦���诤系鞍渍�菌体总蛋白�%。�����诤系鞍字饕R园��宓男问酱嬖冢�璑����喜�析柱纯化后纯度可达�%。经纯化、复性的�~���融合蛋白具有双重活性。�����和�����融合蛋白均能刺激��罨�娜送庵苎A馨拖赴�脑鲋常�页始亮恳览倒叵怠��—����诤系鞍妆然钗�.����痬��雋�一�标准品比活��×��/�相当,而�����融合蛋白比活为���用����タ寺】固寮坝ü獗昙堑亩�梗��魇较赴�嵌悦6ㄔ谝焉�锼鼗����瓼�月�鱿赴�砻娴腟�����蚳�一���诤系鞍捉�屑觳猓�峁�允荆��—���和�����诤系鞍拙�芨咝�6ㄐ奘伪砻嬉焉�锼鼗�腂�.��中瘤细胞,修饰效率均大于�%。结论��究翁獬晒�菇�藀��—����猦�一�重组表达质粒,并实现了�—���融合蛋白的高效表达。��票傅腟����融合蛋白具有双功能活性,������量依赖关系,并且能高效锚定修饰表面已生物素化的肿瘤细胞。��蚳�—�的活性而言,�—���融合蛋白显著高于������合蛋白,而�的活性两者间则无显著性差异。
英文摘要��������温州医学院硕士学位论文��������—���������,����������~�.������·�����������������������������瓾���������,�������甋������琒��������琣������.������琣�����甌����,��一�����—����琻�����������瑆���猙������.���畂���畉��������.�.����籧�����甌�.��
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