动物医学本科毕业论文 高牧11-5王乐乐.doc

河南农业职业学院
论文题目: 鹅血清及卵黄中IgG的测定

学生姓名: 王乐乐
学号: 110580

专业年级: 高牧11-5

2013年 4月 22日
目录
鹅血清及卵黄中IgG的测定
学生:赵冬冬
专业:畜禽生产教育 2004级
指导教师:郎仲武
摘要:免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,简称IgG)指具有抗体活性的动物蛋白。在禽类,母代可以通过卵子将自身的免疫球蛋白传递给子代,对子代起到保护作用[20]。本试验应用ELISA对102枚吉林白鹅种蛋进行检测,检测项目为鹅胚发育过程卵黄中IgG和鹅胚血清中IgG的含量。结果表明,鹅胚血清中和卵黄中IgG含量是,/mL,()/mL。
关键词:鹅;免疫球蛋白G;ELISA
1 前言
卵黄抗体即卵黄免疫球蛋白就是卵黄中的γ—卵黄球蛋白,由于其蛋白质的物理化学性质、免疫学性质等方面与哺乳动物免疫球蛋白存在一定差异[1,2],所以在免疫学领域把由禽卵黄中获得的抗体称为卵黄免疫球蛋白(Immunoglobulin of Yolk,简称IgY)[3]。IgY的用途是非常广泛、多样的,其中最重要的功能是由母体传递IgY给新生儿提供被动地免疫保护力。IgY普遍存在于鸟类、爬行动物和两栖类,在功能上等价于哺乳动物IgG,但其许多生物学性质仍未被发现。
免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)是指免疫系统受抗原刺激后,B细胞转化为浆细胞而产生的具有抗体活性,能与相应的抗原发生特异性结合的球蛋白,或指化学结构与抗体相似的球蛋白。它广泛存在于机体的血清、体液及粘膜分泌液中,是构成机体体液免疫的主要物质,免疫球蛋白分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE[4,5]。禽类已确证的免疫球蛋白有三种:即IgG(IgY)、IgM和IgA[6]。其中IgG是最主要的免疫球蛋白,约占动物血浆丙种球蛋白的70%,分子量约15万,含糖2~3%。IgG具有提高免疫力、增强机体抵抗力等作用。目前国内尚没有定量检测鹅IgG的相关报道。本文应用
酶联接免疫吸附剂测定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,简称ELISA)对鹅血清及卵黄中的IgG含量进行了测定,现将结果报告如下。
2 材料与方法
试验材料
试验动物
吉林白鹅种蛋购于吉林省某种鹅场
主要试剂
磷酸氢二钠分析纯北京化工厂
磷酸二氢钠分析纯北京化工厂
牛白蛋白(生化试剂) 分析纯上海新兴生物有限公司
氯化钠分析纯北京化工厂
饱和硫酸氨Sephadex—G200 分析纯北京鼎国生物有限公司
辣根过氧化物酶分析纯北京鼎国生物有限公司
鹅IgG、鼠抗鹅IgG抗体、兔抗鹅IgG酶标抗体为本实验室自制
仪器与设备
恒温箱、电子天平;40孔聚苯乙烯酶标反应板;XYJ80-1台式离心机;LD4-2A低速离心机;北京医用离心机厂;磁力搅拌器(78-1型磁力加热搅拌器)分光光度计751C型;酶联免疫检测仪DG—3022型;孵化器;冰箱;酸度计pHS-3C ;ELISA板。
实验方法
鹅血清IgG的提取
取健康吉林白鹅的混合血清20mL,加生理盐水20mL,再逐滴加入(NH4)2SO4饱和溶液10mL,使成为20%(NH4)2SO4溶液,充分混合后,静置30min;3000rpm离心20min,弃沉淀;在上清液中再加(NH4)2SO4饱和溶液30 mL,使成50%(NH4)2SO4溶液,充分混合,静置30 min;离心20 min,弃去上清;于沉淀中加入20 mL生理盐水,使之溶解,再加(NH4)2SO4饱和溶液10 mL,使成33%(NH4)2SO4溶液,充分混合后,静置30 min;3000 rpm离心20 min,弃去上清,以除去白蛋白,重复3次;用10mL生理盐水溶解沉淀,装入透析袋;透析除盐,在常水中透析过夜,再在生理盐水中于4℃透析24h,中间换液数次,直至完全除去SO42﹣或NH4﹢离心去沉淀;离心去沉淀(去除杂质蛋白)上清液即为粗提的IgG;将G200凝胶活化、浮选、装柱,∕L pH PBS
液洗脱、平衡。并向其中加入上一步中所提取的粗提的IgG样本,以PBS液洗脱,收集第二蛋白洗脱峰,浓缩即为精提IgG。
鹅血清及卵黄参考阴性与参考阳性的选择及制备
鹅血清参考阴性的制备
取吉林白鹅血清5份充分混合(4ml/份),取此混合液20mL,加生理盐水20mL,充分混合,逐滴加入3