人白介素4(IL-4)ELISA试剂盒说明书.doc

试剂盒说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂盒仅供研究使用
检测范围: ng/ml - 100 ng/ml
最低检测限: ng/ml
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人IL-4,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-4含量。
说明:
试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
概述:
白细胞介素-4(白介素-4,Interleukin-4,IL-4)是II型辅助T细胞(Th2细胞)分泌的细胞因子。白细胞介素-4的生物作用,包括刺激活化B细胞和T细胞增殖、 CD4+T细胞分化成II型辅助T细胞。它也在调节体液免疫和适应性免疫中起关键作用。白细胞介素-4诱导B细胞抗体类别转换向IgE,上调第二型主要组织兼容性复合体的产生。它最初被认为是B淋巴细胞分化因子(BCDF),同时也是B淋巴细胞刺激因子(BSF1)。随着后来人和鼠IL-4被分子化克隆及表达,发现了IL-4的多种功能作用于B淋巴细胞及其他造血及非造血细胞,包括T淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞,肥大细胞、骨系及红细胞系祖细胞,纤维母细胞及内皮细胞等。IL-4在体外及体内均呈现出抗肿瘤效应。
实验原理:
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗IL-4抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-4抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-4呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制:
酶联板(Assay plate ): 一块(96孔)。
标准品(Standard): 2瓶(冻干品)。
样品稀释液(Sample Diluent): 1×20ml/瓶。
生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent): 1×10ml/瓶。
辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent): 1×10ml/瓶。
生物素标记抗体(Biotin-antibody): 1×120μl/瓶(1:100)。
辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin): 1×120μl/瓶(1:100)。
底物溶液(TMB Substrate): 1×10ml/瓶。
浓洗涤液(Wash Buffer): 1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
终止液(Stop Solution): 1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的试剂和器材:
标准规格酶标仪
高速离心机
电热恒温培养箱
干净的试管和Eppendof管
系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存:
血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将