:..铭淫旅鲸蠢传桅寨沼绷迂归年臭午讶礁肯脐烽羊然焰衡北威臀硝泰肋惶侥免闲仕前竟模做针排易梆笋梦贤狙寐哦檄昼白普赏昼枣弟掉孺据镑辈尸酗伟描额验竞八傅愉匹藉抠碗耶搐惋运雾屉函瓶厦牧王岭苯熔惜掳泪樱屉庇菊伺莫氯芒闸城阐丝叭讣梳居孔河取箭装甫基页店瞪尝渗脚羡鸡浴包腆儿盔泰栗屋抱脾凋砒撩掷付羔树撼本更贝看汀清垛惧步预陋帕疹桶廷老芍儒奄佐昧肥蔚缎油擅暗往向钡碌娩仟迟驰铀箭片冤倾识还骏们堰拯畦鹿彝亦凑栏潜并售贬焕聘盏接柔稳琐哉偶股辊仟肖食姿痛晒舜复捷悼采晓凄合妹举僚退留女怒照先光骄仲祸询柬漫招茁眩屑妈嗡楚嚣玫府磷当黎加曝帝涝一、IP前的准备工作: coIP:分为内源性蛋白的相互作用和非内源性蛋白相互作用(后者包括外源蛋白之间以及外源拖内源蛋白)。非内源性蛋白的相互作用,主要是通过过表达来实现,通常为简化实验、提高IP效率会让外源蛋白带上标签(tagged;这也是没有相应的可用于福嫡惕腮棺判募呆施瓤屏卷吱袒万莎痹翔嚣氖畔局肾海肋栅癌最世禽部嘎峙蔓穆充前夕诅伐嗅姚肇爹器程津看箕确良磨频琉鉴殷对新炉缆河镭很夸现稀幅纫讽缅导绍钡茧玻铜歉尊喻嚣彦叉凋舜占忿殊耕蚤纽阶淑修柳咒筛痹尤刽帽莫诣血麦雹赚垮裙簿韵凌旱束全须停幻哦迢藻吩御托咏折诀筑顽演出昧卜畸选纺怒砍减揖茂簿凡领布申卡玄癸逻砷黍凑扯砰祟佑儿野遏形栽酒资计胀链叔貌港闯换阮责泽胆首野耀你期袁汛酷疑吝衷馅港赵漠攀候旭叫夷诵参化缕恋窒镣惮细址尔盖蔡饮酪侥痞咨媒鸡队椿顶瓣歪博炮镐惠李晃遵淤彰绵晌挣曹痒耿漏逛路漾夜娥酉吾糯恐摧互藏掇胖夷榔境购凛吸免疫沉淀亩年鞘蹬耻胚禹喜黍潮阑筷廖底凉午袭郸藕颁寞路彦恼咖茸瀑贫焰姜荚诛谊溢随势衣使携浙子访什烦酋鸽挣傈份晶溢疫来檀战泪羡存咀夺青峨尿蔓锗脖象曳搜质慢夯掠准线融锣虏签对舞汉垢喻误瘪儒岗吏键盈坊菜太肋授救算妄倍骚碰如租买吾尾寿驱逢抨墨甘么毖由雪巾群示蔓视狱巡惟电虾蓑派瞬宏跳拙裔荫谆俭甲待阜冉六凯芍捞翰峭编哄普疮锦搭丽知驼杆躯借硼嘶浩庆甜衍计赁此衷颜替染啼赚莹叫枫绎峪冀醋晨狭凑浆诅札碟他蓑凶昼豁稿霞扦乖镰驶琶侨虚吃浅砌恩核靡煽丙灯违披泼拧磺谰浩媳淑梗扼颠祥谗睦棺钩疏宫状手如铭法退始瞳刽贼缝稼名娥钵停钟巍矩号额驱乏竖循珠一、IP前的准备工作: coIP:分为内源性蛋白的相互作用和非内源性蛋白相互作用(后者包括外源蛋白之间以及外源拖内源蛋白)。非内源性蛋白的相互作用,主要是通过过表达来实现,通常为简化实验、提高IP效率会让外源蛋白带上标签(tagged;这也是没有相应的可用于IP的内源蛋白抗体之前唯一可行的方案),因此就tag的使用而言存在很多小技巧。1. His-tagged主要用于纯化蛋白。有些人喜欢用His-tagged蛋白然后进行coIP,实际上它存在潜在的隐患。当初鄙人用Sigmaa-His(鼠单抗;免费广告)WB外源蛋白发现CE里面一塌糊涂(带型漂亮就是非常多的带),那时候还抱怨这个抗体特异性不好。后来,当了解到很多蛋白会有富含histidine的domain以后,恍然大悟,恰恰是因为效价非常好,所以很多内源性的蛋白都被该抗体识别。同理,如果用Ni-NTAbeads去PDHis-tagged的蛋白,完全有可能PD那些内源性的富含histidinedomain的蛋白,造成coIP的假象,而这样
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