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《三明农业科技》年第期()
大花蕙兰种质资源的亲缘关系研究
马红勃赖鋆英许旭明陈昌铭尚伟罗志花江秋萍
三明市农业科学研究所
大花蕙兰( )为兰科兰属种中亲本的选配提供理论依据。
( ) 植物的杂交种,多数具有独占春、 1 材料与方法
虎头兰、美花兰、黄蝉兰、地旺兰等血统。目前 材料
已经成为五大盆栽兰花(大花蕙兰、蝴蝶兰、石供试品种的试样采集于福建省三明市农业
斛兰、卡特兰、中国兰)之一,也是重要的切花兰科学研究园艺中心大花蕙兰圃,共 46 份,其中
花种类之一。目前,中国大花蕙兰品种的选育中国台湾 11 份,日本 21 份,澳大利亚 8 份,韩
研究尚处于起步阶段,亲本及生产上应用的品国 2 份,国兰原生种 4 份,其品种名及编号详见
种主要来源于国外和台湾,大花蕙兰的品种选表 1。室内试验于三明市农业科学研究所分子
育主要集中在日本、美国、澳大利亚、台湾等国生物学实验室完成。
家和地区。从分子水平上揭示大花蕙兰种质资 方法
源遗传多样性及其亲缘关系,是新品种选育的 DNA 的提取
基础性工作。取大花蕙兰幼嫩叶片,基因组DNA的提取
SRAP(Sequence-relatedamplifiedpolymorphism, 和浓度测定参考李冬梅等的方法。
相关序列扩增多态性)是由 Li 和 Quiros 开发的 PCR 扩增
一种新型的分子标记。该标记结合了 AFLP 及 SRAP-PCR 扩增总体积 20 l,其中包括
RAPD 的优点,试验结果稳定可靠,再现性高。 1×buffer [10 mmol/LTris-HCl,pH ,50 mmol/
SRAP 已经应用于西葫芦、海岛棉、野牛草、小 LKCl, mmol/L MgCl2,% Nonidet P40,
麦、枇杷、烟草、青稞、杨树、辣椒、油菜、狗牙根 dNTP(各 200 mol/L),上下引物各 33 ng,DNA
等植物的遗传多样性及亲缘关系分析、遗传连模板 20ng,Taq 酶 U (Taq 酶、1×buffer、SRAP
锁图谱构建。SRAP 标记应用于大花蕙兰的遗引物和 dNTP 均购自上海生工生物工程技术服
传多样性及亲缘关系分析尚未见报道。本研究务有限公司)。扩增条件为 94℃预变性 5min,
对福建省三明市农业科学研究所现有的、来源反应前 5 个循环在 94℃1min,35℃1min,72℃
于不同国家和地区的 42 个大花蕙兰品种及 4 1min; 随后的 30 个循环复性温度提高到 60℃,
个国兰原生种的遗传亲缘关系进行 SRAP 分最后 72℃延伸 5min,4℃保存。PCR 在 MG96G
析,以期为大花蕙兰种质资源利用以及杂交育梯度 PCR 仪中进行。
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表 1 本试验所用材料及编号
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电泳检测从 34 个SRAP 引物组合中共筛选出带型稳定、
采用北京六一仪器厂生产的 DYY-11B 型多态性好的引物 29 个,对 42 个大花蕙兰品种
三恒多用电泳仪,用 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳分及