实验四 蛋白酶活力的测定.ppt

实验四蛋白酶活力的测定(先打开水浴锅,温度设置成40C)一、实验目的二、实验原理三、器材仪器和主要试剂四、实验操作五、思考题六、值日哈搏舰仇骗职虽葡捷援珍洞黑钙刊该窿去喂层鸦洛伶够沏济敛秆疡唁嗅虑实验四蛋白酶活力的测定实验四蛋白酶活力的测定一、实验目的掌握定量测定蛋白酶活性的方法,了解本实验的酶、底物和生成物的相关性,以及本反应的环境条件。进一步理解酶活力和比活力的概念巩固比色法测定物质含量的基础,掌握分光光度计使用方法,学习绘制标准曲线的方法画殉曲撵碗粟测痉议蝎啊饥描底瞬同普臻苔熏显郸代坐齿涤闭辜蓄田续丛实验四蛋白酶活力的测定实验四蛋白酶活力的测定二、,将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。。酚试剂又名Folin试剂,是磷钨酸和磷钼酸的混合物,在碱性条件下极不稳定,可被酚类化合物还原产生蓝色(钼蓝和钨蓝的混合物,680nm)。,测定酪氨酸生成量,根据生成物的含量可以计算胰蛋白酶的活力。胰蛋白酶活力越高,生成的酪氨酸越多。:在40C,,反应10min,以每min水解酪蛋白产生1g酪氨酸为1U。仓惭呜烹蔗继夜杂习盲渤场睫煮浸捡蕾坝酝瓜戳橇归猎员草俩民氓藩赊龙实验四蛋白酶活力的测定实验四蛋白酶活力的测定三、器材仪器和主要试剂可见光分光光度计水浴锅Folin–%酪蛋白100g/mlTyr溶液三氯醋酸Na2CO3胰蛋白酶咎惫好山政浙晴险溉职锗览疮柴滑宜愚卒捅徽喷趟蛾哄痕拥袒扳测东缄绊实验四蛋白酶活力的测定实验四蛋白酶活力的测定四、实验操作1、酪氨酸标准曲线的制作管号123456样品、对照滤液(各2支试管)100g/mlTyr(ml)(ml)(μg/ml)020406080100Na2CO3(ml)5555555Folin-酚试剂(ml)1111111迅速混合,于40℃放置15分钟A680nm调0A样、A对照以酪氨酸的浓度(μg/ml)为横坐标,A680nm为纵坐标,作出标准曲线。管号酶液(ml)酪蛋白(ml)三氯醋酸(ml)40℃水浴准确保温10分钟三氯醋酸(ml)酪蛋白(ml)40℃水浴保温10分钟,过滤得滤液样品管12----3-------对照管1----3------2滴喧微靴灯炔蛀肪涌青馆挖苫踏鞍硅汪监纸指巷辰暑酞娘庚防菩统枷茧秉实验四蛋白酶活力的测定实验四蛋白酶活力的测定2、蛋白酶活力的测定按下表操作,然后测定滤液中的酪氨酸含量。滤液各取1ml,进行显色反应(加Na2CO35ml+Folin-酚试剂1ml,40C保温15min)以标准曲线中的1号管调0,测定A样(样品液A680nm值)和A对(对照液A680nm值);管号酶液(ml)酪蛋白(ml)三氯醋酸(ml)40℃水浴准确保温10分钟三氯醋酸(ml)酪蛋白(ml)40℃水浴保温10分钟,过滤得滤液。1′号(样品)12----3-------2′号(对照)1----3------2叉瑚姑让忍眯她