:..《核酸的酚抽提》实验报告实验原理在EDTA和SDS等去污剂存在下,用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提,可以得到哺乳动物基因组DNA,用此方法得到的DNA长度为100~150kb,适用于λ噬菌体构建基因组文库和Southern印迹分析。;-Cl,;,;3mol/LNaAc,;分别进行高压灭菌。:10mg/mL,配好后用一次性过滤器过滤,-20℃保存。:100mmol/LNaCl,10mmol/LTris-Cl(),25mmol/LEDTA()。:200mmol/LNaCl,20mmol/LTris-Cl(),50mmol/LEDTA(),200μg/mL蛋白酶K,1%SDS。:将胰RNA酶溶于10mmol/LTris-Cl()、15mmol/LNaCl溶液中,浓度10mg/mL,于100℃水浴处理15min以破坏DNA酶,缓慢冷却到室温,-20℃保存。:10mmol/LTris-Cl(),1mmol/LEDTA()。()∶氯仿∶异戊醇=25∶24∶1(体积比)。∶异戊醇=24∶1(体积比)。,,在冰浴中用玻璃匀浆器匀浆至无明显组织块存在,但勿将细胞破碎。,5000r/m离心30~60s,弃上清。,分两管,,缓慢翻转混匀,55℃水浴处理12~18h。,37℃水浴1h。,冰浴冷却,10000r/m离心10min。含DNA的水相一般在上层,中间为蛋白质沉淀,下层为有机相,但DNA浓度过高时,含DNA的水相会在下层,要注意观察判断。,加等体积氯仿/异戊醇,冰浴预冷,10000r/m离
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