病毒载体研究进展.ppt

病毒载体研究进展基因载体系统病毒载体系统非病毒载体系统腺病毒载体反转录病毒载体腺伴随病毒载体单纯疱疹病毒载体慢病毒载体裸DNADNA-阳离子脂质复合物DNA-蛋白质复合物细胞内包装细胞外包装DNA-阳离子多聚物DNA/RNA嵌合物中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室(北京宣武区迎新街100号)GeneGeneexpressionsystemGenedeliverysystemGenevectorsystem病毒载体概述(1)要求:1、携带外源基因并能包装成感染性病毒颗粒2、介导外源基因转移和表达3、对机体不致病容量:自身基因组大小的105%~110%类型:1、重组型病毒载体2、无病毒基因的病毒载体复制缺陷型可复制型复制缺陷型组成:1、病毒复制和包装元件2、病毒基因3、插入的外源基因或元件4、病毒外壳/外膜用途:基因转移和表达1、基因治疗2、疫苗3、器官移植4、组织工程5、转基因动物6、基因功能研究病毒载体概述(2)优点:1、利用病毒天然的感染性进入细胞,转导效率高;2、复杂的装配过程由细胞完成;3、不同的病毒载体具有不同的表达特点。存在的问题:1、安全性 2、靶向性 3、有效性细胞毒性染色体毒性免疫毒性转导靶向性转录靶向性转导效率靶向性基因表达水平和持续时间表达的可调控性常用的病毒载体的特点:病毒载体研究方向1、病毒包装系统2、无病毒基因的病毒载体6、自我扩增型病毒载体7、条件增殖型病毒载体5、嵌合型病毒载体3、靶向性病毒载体4、可调控表达的病毒载体8、新病毒载体病毒载体包装系统组成:1、宿主细胞2、辅助元件(辅助质粒、辅助病毒)3、被包装的DNA/RNA包含顺式作用元件单因素生产系统(ponentsystem)双因素生产系统(ponentsystem)gagpolenvLTRLTR图1反转录病毒包装系统示意图图2腺病毒包装系统示意图293cellE1a,bJM17AdShuttle293cellE1a,b多因素生产系统(ponentsystem)多因素系统双因素系统图3腺病毒伴随病毒包装系统示意图hostcellHelpervirusHelperplasmidrepcapVectorplasmidHostcell+vectorDNAHelpervirus+binanthelpervirus(rHSV-repcap)repcap无病毒基因的病毒载体被包装的DNA/RNA中不含任何病毒编码基因,只保留其复制和包装所必需的顺式作用元件。获得的重组病毒颗粒具有野生型病毒的外壳/外膜和感染性,但不表达病毒蛋白。腺伴随病毒载体:反转录病毒载体:腺病毒载体:单纯疱疹病毒载体:LTRLTRgenegeneITRITRpAgeneITRITRpAgenepacorigenegenegenegene无辅助病毒包装系统图5重组AAV无辅毒包装系统adenovirusgeneITRITRaavvectorplasmidE2aE4orf6VAHelperplasmid:293细胞E1a,bcre293-cregeneITRITRAdenoviruswithpackagingsignalflankedbyloxP图6mini-adnovirus无辅毒包装系统