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5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2mRNA表达的影响5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2mRNA表达的影响作者:杜雅冰,邵应举,樊青霞,孙桢,王琳,赵培荣作者单位:(郑州大学第一附属医院肿瘤内科,河南郑州 450002)【摘要】目的探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干预对食管鳞癌细胞株Eca9706生长增殖及其组织因子途径抑制物2(tissuefactorpathwayinhibitor-2,TFPI-2)基因表达的影响。方法选取食管鳞癌细胞株Eca9706,并用不同浓度的5-Aza-CdR处理该细胞株。MTT法检测干预前后细胞增长率的变化,FCM法检测干预前后细胞凋亡率的变化,RT-PCR技术检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2基因mRNA的表达,免疫组化检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2蛋白的表达。结果食管鳞癌细胞株Eca9706存在TFPI-2基因超甲基化状态,经5-Aza-CdR处理后,超甲基化状态解除,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率明显提高(P<);细胞中TFPI-2蛋白表达明显增强,同时mRNA的表达水平也较处理前明显提高(P<)。结论食管癌细胞系TFPI-2基因超甲基化可抑制其mRNA表达,当其超甲基化解除后,细胞增殖受到抑制,同时细胞凋亡率相应提高。【关键词】食管癌;组织因子途径抑制物-2;5-氮杂-2-脱氧胞苷;甲基化;免疫组化;逆转录聚合酶链反应;凋亡ABSTRACT:Objective Toexploretheeffectsof5-Aza-2-deoxycytidine(5-Aza-CdR)interventiononthegrowthandproliferationofEca9706celllineandproteinexpressionoftissuefactorpathwayinhibitor-2(TFPI-2).Methods Eca9706celllinewastreatedby5-azaCdRofdifferentconcentrations;MTT,flowcytometry,immunohistochemistryandRT-hecellgrowth,apoptosis,andtheexpressionofTFPI- Eca9706celllinehadhypermethylationofTFPI--Aza-CdRtreatment,theproliferationofEca9706wasinhibited,theapoptosisratewasalsoincreasedsignificantlyintheconcentration--PCRdetectedthatmRNAexpressionofTFPI-2geneinEca9706celllinerecoveredsignificantly(P<).Conclusion 5-Aza-CdRcanslowthegrowthofEca9706cell,increasetheapoptosisrate,reactivatetheTFPI-:esophagealcarcinoma;tissuefactorpathwayinhibitor-2;5-Aza-CdR;methylation;immunohistochemistry;RT-PCR;apoptosis组织因子途径移植物2(tissuefactorpathwayinhibitor,TFPI-2)是丝氨酸蛋白酶抑制物,在调控肿瘤细胞浸润转移方面起着重要作用。目前,关于TFPI-2在食管癌中的基因表达情况的分析研究尚少。本研究旨在探讨TFPI-2基因的失活机制,并寻找食管癌治疗的新靶点。1 材料RPMI-1640培养基购自北京索莱宝生物科技有限公司;标准胎牛血清购自天津市灏洋生物制品科技有限公司;Trizol试剂购自MBI公司;RT-PCR试剂盒购自MBI公司;5-Aza-CdR购自Sigma公司;人食管癌细胞株Eca9706由郑州大学肿瘤生物学研究室惠赠。 细胞培养和药物处理人食管癌细胞Eca9706以含10mL/L胎牛血清的RPMI-1640培养基,37℃、50mL/LCO2培养箱培养,每2~3d消化传代1次。 MTT法检测干预前后细胞增长率的变化取对数生长期细胞,调整密度至5×1