第20 高效液相色谱法.ppt

第二十章高效液相色谱法HPLC第一节概述highperformanceliquidchromatography一、HPLC与经典LC区别二、HPLC与GC差别三、高效液相色谱仪流程图四、特点以气相色谱理论为基础,在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法(一)HPLC与经典LC区别主要区别:固定相差别,:仅做为一种分离手段柱内径1~3cm,固定相粒径>100μm且不均匀常压输送流动相;分析周期长;柱效低(H↑,n↓);无法在线检测,:分离和分析柱内径2~6mm,固定相粒径<10μm(球形,匀浆装柱)高压输送流动相;分析时间大大缩短;柱效高(H↓,n↑);可以在线检测,灵敏度高表20-1HPLC法与经典LC法性能对比经典LCHPLC固定相一般规格特殊规格固定相粒度(μm)75~5003~10粒度分布(RSD)20~30%<5%柱长(cm)10~1003~25(分析型)柱内径(cm)2~~(MPa)~~40柱效(理论塔片数/m)10~1003×104~8×104样品用量(g)1~1010-6~10-4分析所需时间(h)1~~、HPLC与GC差别相同:兼具分离和分析功能,均可以在线检测主要差别::能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品,高沸点、热稳定性差、离子型等样品不可检测占有机物的20%HPLC:溶解后能制成溶液的样品,不受样品挥发性和热稳定性的限制分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广泛,占有机物的80%:流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力,只与固定相作用HPLC:流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力,为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素,对分离起很大作用流动相种类较多,:加温操作HPLC:室温;高压(液体粘度大,峰展宽小)三、(滤棒,可滤去颗粒状物质)(输液泵)————、HPLC的特点和应用“三高”“一快”“一广”高柱效——n=104片/米,柱效高(远高于一般LC)高灵敏度高选择性分析速度快应用范围广泛(可分析80%有机化合物)第二节基本理论和条件选择热力学理论:塔板理论——平衡理论动力学理论:速率理论——Vander方程一、塔板理论二、速率理论三、HPLC法中分离条件的选择基础一、塔板理论二、速率理论(与GC对比)1.