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研究简报邻氯青霉素单克隆抗体的制备及特性鉴定中国生物工程杂志ChinaBiotechnology,2006,26(2):66~68王琳*齐孟文冯才伟孟丽丽(中国农业大学生物物理系北京100094)摘要采用碳化二亚胺法,将邻氯青霉素(cloxacillin)与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术获得了一株能稳定分泌抗邻氯青霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株2H8B1F4。间接ELISA方法测定,抗体亚类为IgG1,其细胞上清抗体效价为1∶1000,腹水效价为1∶4×105。与其结构类似物苯唑青霉素、%%,和氨苄青霉素、羟氨苄青霉素和苄青霉素无交叉反应。体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定。为进一步研制检测邻氯青霉素的ELISA试剂盒奠定基础。关键词β内酰胺抗生素双氯青霉素单克隆抗体中图分类号Q819收稿日期:20051110修回日期:20051228*电子信箱:(cloxacillin,CX)又名氯洒西林,属β内酰胺类半合成青霉素,主要用于治疗葡萄球菌、链球菌或肺炎球菌导致的感染,可有效抑制对青霉素已产生抗药性的细菌,其作用机制是通过抑制细菌黏肽转肽酶的活性来阻断细胞壁的形成从而呈现杀菌活性。这类药物因其耐酶、耐酸、广谱和长效而被广泛应用[1]。在治疗乳牛乳腺炎、阴道炎和其他疾病时青霉素为首选有效抗生素,乳牛用药后,青霉素将不可避免地存在于最初几天的乳汁中形成药物残留,不仅会影响牛奶的品质,还会使人产生过敏反应,危害人体健康。1996年美国食品与药物管理局(FDA)对奶样中调查结果阳性报告[1]显示残留药物主要为青霉素系。由于过敏反应和细菌产生耐药性等原因,许多国家对动物使用β内酰胺类抗生素和食品残留进行了严格监控。青霉素类抗生素药物的残留分析主要包括高效液相色谱法、微生物法、薄层色谱法和免疫法[2~4],其中酶联免疫吸附测定法(ELISA)具有简便、快速、灵敏度高、特异性强和成本低廉的优点,尤其适合对该类药物的快速检测分析。目前国外已有该类药物ELISA检测方法的相关研究和试剂的商业出售,国内尚未见有关这方面研究的报道。本研究旨在应用杂交瘤技术建立能稳定分泌抗邻氯青霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为下一步的邻氯青霉素ELISA试剂盒开发奠定基础。(cloxacillin)、双氯青霉素(dicloxacillin)、苄青霉素(penicillinG)、氨苄青霉素(ampicillin)、羟氨苄青霉素(amoxicillin)、牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)及碳化二亚胺盐酸盐(),均购自Sigma公司。HRP标记的羊抗鼠IgG、羊抗鼠IgG亚类抗体及HRP标记的兔抗羊IgG,德国进口分装。弗氏完全佐剂(FCA)、弗氏不完全佐剂(FIA)、PRMI1640干粉均购自北京欣经科生物工程公司。HAT、HT培养基及PEG(Mr4000)为Gibco产品。Sp2/0骨髓瘤细胞为中国农业大学核技术农业应用实验室保存。BALB/c小鼠购于中国科学院遗传研究所。,6]用碳化二亚胺法将半抗原CX偶联于载体蛋白BSA和OVA,形成完全抗原BSACX和OVACX。制备过程如下,.