人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒说明书(DOC).doc

人同型半胱氨酸(Hcy)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂盒仅供研究使用
检测范围: nmol/ml –50 nmol/ml
最低检测限: nmol/ml
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人Hcy,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中Hcy含量。
说明
试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
概述
同型半胱氨酸Hcy又称高半胱氨酸,是一种含硫氨基酸,不属于组成蛋白质的20种氨基酸,体内不能合成,只能来源于蛋氨酸的分解代谢。Hcy是甲硫氨酸代谢形成的中间产物。,在体内由甲硫氨酸转甲基后生成,有两种途径。再甲基化途径:约有50%Hcy在蛋氨酸合成酶的作用下,以维生素B12为辅因子,以N5-甲基四氢叶酸为甲基供体,发生再甲基化,重新合成蛋氨酸。转硫途径:另外约50%的Hcy经转硫途径不可逆生成半胱氨酸和α酮丁酸,此过程需维生素B6依赖的胱硫醚β合成酶和甲硫氨酸合成酶参与。Hcy合成和代谢途径及其相关的酶系统、叶酸、维生素B12和维生素B6的缺乏、MTHFR、甲硫氨酸合成酶(MS)、CBS的缺陷都可引起高同型半胱氨酸血症。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗Hcy抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗Hcy抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Hcy呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
酶联板(Assay plate ): 一块(96孔)。
标准品(Standard): 2瓶(冻干品)。
样品稀释液(Sample Diluent): 1×20ml/瓶。
生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent): 1×10ml/瓶。
辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent): 1×10ml/瓶。
生物素标记抗体(Biotin-antibody): 1×120ul/瓶(1:100)。
辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin): 1×120ul/瓶(1:100)。
底物溶液(TMB Substrate): 1×10ml/瓶。
浓洗涤液(Wash Buffer): 1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
终止液(Stop Solution): 1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的试剂和器材
标准规格酶标仪
高速离心机
电热恒温培养箱
干净的试管和Eppendof管
系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本