甘油的检测方法汇总.docx

甘油的检测方法汇总在发酵行业中,甘油作为底物,是发酵液中生物合成的直接前体,会影响外源蛋白的启动表达效率,其含量的高低直接影响产物的发酵单位,是决定菌种取舍的重要指标,是提高工程菌的发酵密度,提高产品生产率的关键。在生物柴油生产中,它是副产物,其含量直接影响生物柴油的使用性能,是衡量生物柴油产品品质的重要指标之一。此外,甘油能与水结合以防止红细胞的冷冻损伤,能延长红细胞的保存期,被普遍用作细胞内冷冻保护剂等。由于甘油用途很广,因此其含量的测定具有非常重要的意义。目前国内外甘油含量的测定方法较多,主要有高碘酸氧化法、Cu2+络合比色法、酶比色法法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、近红外光谱法以及原子吸收法等。下面将对其进行简要概述::高碘酸氧化法是目前常见用于甘油含量检测的方法,利用高碘酸与甘油发生氧化还原反应,剩余高碘酸及反应生成的碘酸与碘化钾反应生成碘,再用硫代硫酸钠进行滴定,根据消耗的硫代硫酸钠的量来计算甘油的含量。,加少量水溶解,然后转移至100mL容量瓶中,用水稀释至标线,摇匀,静置。用移液管准确移取10mL上述溶液于碘量瓶中,加入20mL高碘酸钠溶液,混合均匀后,于黑暗中避光静置40min,然后加入碘化钾溶液和20%盐酸溶液各15mL,~,然后用硫代硫酸钠标准溶液滴定,近终点时,加入2mL淀粉指示剂溶液,继续滴定至溶液蓝色消失。同时做试样空白。:式中:w——样品中甘油的含量,%;V1——空白试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积,mL;V2——试样消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积,mL;C——硫代硫酸钠标准溶液的浓度,mol/L;M——甘油相对分子质量;:它是利用酶的特异性催化反应建立的测定甘油的一种酶学方法,是指甘油在甘油激酶作用下转化为3-磷酸甘油,后者由磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢,然后过氧化氢和4-氨基安普比林、4-氯酚在过氧化物酶催化下反应生成紫兰色、能在500nm左右有特征吸收峰的醌亚胺,通过颜色深浅即吸光度的变化测定所生成的H2O2,甘油的含量与生成的H2O2成正比,这样用比色法就可以测定甘油的含量。:500nm (480~520nm) 反映温度:37℃ 比色杯光径:1cm 取一定量R1(参看R2瓶签)加入1瓶R2中,溶解后即为工作液,工作液预先保温至测试温度。,在反应温度保温10分钟,以试剂空白管校零,记录校准及样品OD值。: 甘油浓度=A样品/A校准×校准浓度(mmol/L或mg/dl) 高效液相色谱法原理:高效液相色谱法(HPLC)的原理是以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,利用色谱柱对待测混合物先进行分离,然后再进行检测,从而实现对试样的分析,因而其测量的准确性和精确度较高,目前已成为检测生化分子较常用的一种方法。,,在转速8000r/min、温度4℃下离心10min,经微孔滤膜过滤用于HPLC分析;将甘油标准