冠心病蛋白质组学研究-外科学专业论文.docx

摘要目的:冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronaryarterydisease,CAD,冠心病)是最主要的心血管疾病之一,每年在全球约有8,140,000人死于冠心病,%。有关冠心病的病因和发病机制,目前有多种假说,但确切的机制尚未明确。文献中有不少关于冠心病分子生物学机制的研究成果,这些发现为理解冠心病的发病机制提供了各种依据。利用全基因组关联研究(genomewideassociationstudy,GWAS)的方法,至少已经发现有100多处单核苷酸变异(singlenucleotidevariants,SNVs)与冠心病发病相关。与此同时,也出现了不少研究血浆蛋白变化与某些可能与冠心病相关病理过程,如:炎症反应、血小板活化、凝血功能等关系的研究。然而,参与冠心病发病的蛋白质,尤其是在那些需要接受冠状动脉旁路移植术(coronaryarterybypassgrafting,CABG)的复杂冠脉病变中的蛋白质,其变化趋势可能尤为复杂,目前也没有相关的研究。本研究的目的在于借助同位素标记相对和绝对定量技术(Isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation,iTRAQ),将患有三支病变合并/不合并左主干病变、需要行CABG术的患者的血浆与非冠心病患者进行比较,从而找出特殊表达的蛋白质组。方法:从2013年4月22日至2015年9月24日,共有320名行冠脉造影检查的受试者序贯入选本研究,并分为两组:CABG组(160人,冠心病,行CABG术)、Control组(对照组160人)。CABG组的患者均为经冠脉造影证实存在三支病变合并/不合并左主干病变者;Control组的160名患者则经冠脉造影检查排除了冠心病的可能。入选者排除标准:二次心脏手术;神经系统疾病(如:脑血管事件(CVA));严重的肺部疾病(肺功能检查提示暂不宜手术者);肾功能衰竭(术前测定肌酐、尿素氮);肝脏疾病(术前测定转氨酶);活动性炎性疾病;术前有凝血性疾病;术前有房颤病史;甲状腺功能异常。在进行CABG手术前或造影术中,使用EDTA管收集血液标本2ml。将收集到的血样尽快用3,500rpm离心15min,将上层血浆小心分离至冻存管中,标记编号,并放置于一80℃的低温冰箱内。在两组中分别选出随机选出20例男性、20例女性的血浆标本,共4组80例标本。每例标本取lOOul,按组混合为2ml的样本,4份样本分别标记为:CABGM(CABG组,男性),CABGF(CABG组,女性),CM(control组,男性)及CF(controlgroup,女性),用于iTRAQ检测。使用Mascot搜索引擎完成蛋白检索、定量分析。<,确定为差异蛋白。利用CABG组(n=120,男性=61)和control组(n=120,男性=60)的血浆标本,选取差异蛋白中的6种进行酶联免疫吸附测定(human万方数据enzyme一1inkedimmunosorbentassay,ELISA)验证。结果:iTRAQ测定共检测出544种蛋白,其中有35种蛋白上调表达,41种蛋白下调表达(,p<)。选取的6种蛋白质中,凝血因子XlIIB链(coagulationfactorXlIIBchain,F13B)、血小板因子4(plateletfactor4,PF4)及分泌型卷曲相关蛋白1(secretedfrizzled—relatedprotein1,sFRPl)上调表达,维生素D结合蛋白(vitaminD-bindingprotein,DBP)、甘油醛一3一磷酸脱氢酶(glyceraldehyde一3一phosphatedehydrogenase,G3PDH)及备解素(properdin,CFP)下调表达()。在ELISA检测中,CFP、DBP、PF4及sFRPl的血浆水平明显上调(,p<)。其中DBP、PF4和sFRPl均与冠心病、心肌梗死病史分别呈正相关关系()。PF4行ROC检测,,,%,%(YI=)。结论:本研究中共发现76种蛋白质的表达在冠心病患者和非冠心病患者之间存在差异。参与凝血、血小板活化、补体激活及Wnt/fz信号转导通路的蛋白,可能在冠心病的发病过程中发挥着重要的作用。PF4和sFRPl在复杂血管病变的冠心病患者中的表达明显上调。ROC测试提示,PF4在临床上可作为辅助诊断复杂血管病变冠心病的一种生物标记物。关键词:冠心病;蛋白质组学;血小板因子4;分泌型卷曲相关蛋白12万方数据Ab