细胞凝集反应实验报告.doc

【实验题目】细胞凝集反应【实验目的】1、了解细胞的表面结构。 掌握细胞凝集的原理。 掌握细胞凝集实验的操作方法。【实验材料与用品】1. 试剂:PBS缓冲溶液、%的氯化钠溶液(生理盐水)2. 器具:酒精棉球、双凹片、载玻片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管3. 材料:兔子静脉血【实验原理】凝集素凝集素(lectin)是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一结合的蛋白质,它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。目前已发现近千种植物中含有凝集素,在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物、人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。常用的为植物凝集素,通常以其被提取的植物命名,凝集素为它们的总称。在细胞表面,组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链,形成细胞外被(糖萼)。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接,在细胞间形成“桥”的结果,加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。细胞凝集细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起,成为一簇不规则的细胞团,目前认为,细胞间的联系、细胞的生长和分化、肿瘤的发生与免疫反应都与细胞表面的分枝状糖分子有关。细胞凝集的反应技术(1)直接凝集反应技术颗粒性抗原与相应的抗体血清混合后,在电解质的参与下,经过一定时间,抗原抗体凝集成肉眼可见的凝集块,这种现象称为凝集反应。血清中的抗体称为凝集素。抗原称为凝集原。细菌或其他凝集原都带有相同的电荷(阴电荷),在悬液中相互排斥而呈均匀的分散状态。抗原和抗体相遇后,由于抗原和抗体分子表面存在相互对应的化学基团,因而发生特异性结合,称为抗原抗体复合物,由于抗体与抗原结合,降低了抗原分子间的排斥力,抗原表面的亲水基团减少,此时已有凝集趋势,在电解质参与下,中和了抗原抗体复合物的大部分电荷,使之失去了经典排斥力,分子间相互吸引,凝集成较大颗粒。出现了肉眼可见的凝集反应。间接凝集反应技术可溶性抗原(或抗体)吸附于免疫学反应无关的颗粒表面上,当这些致敏的颗粒与相应的抗体(或抗原)相遇时,就会产生特异性的结合,在电解质的参与下,这些颗粒就会发生凝集现象。这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应技术。载体具有吸附抗原(抗体)的载体很多,如聚苯乙烯乳胶、白陶土、活性炭、人和多种动物的红血球、某些细菌等。良好的载体有以下几点基本要求:在生理盐水或缓冲液中无自凝现象;大小均匀;比重与介质相似,短时间内不沉淀;无化学或血清学活性;吸附抗原(或抗体)后,不影响其活性;目前使用最广泛的是人的O型红血球和绵羊红血球。后者使用更广,因其来源方便,另外绵羊红血球的表面有大量的糖蛋白受体,极易吸附某些抗原物质,吸附性能好,且大小均匀一致。【实验步骤】大体流程土豆凝集素+红细胞悬液混合取兔子静脉血配置1%红细胞悬液PBS+红细胞悬液混合(对照)显微镜下观察摇晃5-10min观察具体操作称取土豆去皮块茎2g,加10mlPBS缓冲液,浸泡24小时,浸出的粗提液中即含有可溶性土豆凝集素。(老师已做好) 2、抽取兔子静脉血液(加抗凝剂)1ml,加生理盐水3ml,在1000r/min条件下,离心5min,重复3次离心,最后按压积红细胞体积用生理盐水配成1%红细胞悬液。 3、分别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞悬液各一滴,置双凹片左孔内,充分混匀。 4、同时分别用滴管吸取PBS缓冲液和1%的红细胞悬液各一滴,置双凹片右孔内,充分混匀,