大鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒说明书.doc

试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供研究使用 预期应用ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中磷脂酶A2(PLA2)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中PLA2水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入PLA2抗原、生物素化的抗大鼠PLA2抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的PLA2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成酶联板:一块(96孔)标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,其浓度为200ng/mL,做系列倍比稀释后,分别稀释成200ng/mL,100ng/mL,50ng/mL,25ng/mL,,,,其原液直接作为最高标准浓度,样品稀释液直接作为标准浓度0ng/mL,临用前15分钟内配制。如配制100ng/ml标准品:,混匀即可,其余浓度以此类推。样品稀释液:1×20ml/瓶。检测稀释液A:1×10ml/瓶。检测稀释液B:1×10ml/瓶。检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以抗体稀释液A1:100稀释。检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以抗体稀释液B1:100稀释。底物溶液:1×10ml/瓶。浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。终止液:1×10ml/瓶(2NH2SO4)。:请离心后收集上清,并将标本保存于-20℃,且应避免反复冻融。:标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul,余孔分别加标准品或待测样品100ul,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100ul(取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干。每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液)100ul,37℃,60分钟。温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干。依序每孔加底物溶液90ul,37℃