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第 12 卷第 1 期过程工程学报
2012 年 2 月 The Chinese Journal of Process Engineering Feb. 2012
超顺磁性聚醋酸乙烯酯微球亲和分离纳豆激酶
孔鹏 1,2,谢渝春 1,魏雪团 1,2,徐林 1,2,杨良嵘 1,李鹏飞 1,2,周华从 1,2,刘会洲 1
(1. 中国科学院过程工程研究所绿色过程与工程实验室,北京 100190;2. 中国科学院研究生院,北京 100049)
摘要:采用改进悬浮聚合法制备了磁性聚醋酸乙烯酯微球,经水解、氨基化修饰,以戊二醛作间隔臂偶联配基对氨
基苯甲脒,制得磁性 PVA 亲和微球,用于纳豆激酶粗酶液的分离纯化,对所制微球进行了表征,研究了纳豆激酶的
吸附平衡、吸附和解吸动力学、酶的纯度和酶活回收. 结果表明,磁性微球具有较高的比饱和磁化强度( emu/g),
40 min 即可达到纳豆激酶的吸附平衡,15 min 内完成酶的解吸,酶活回收率接近 75%,纯化因子为 ,酶的分子
量为 28 kDa,电泳分析为一条带.
关键词:纳豆激酶;磁性 PVA 微球;亲和分离;吸附;动力学
中图分类号: 文献标识码:A 文章编号:1009−606X(2012)01−0105−07
1 前言的亲水性[12],能偶联高容量的亲和配基,增加吸附量,
血栓病严重危害人类健康,目前临床上应用的溶栓且使用悬浮聚合法制备的磁性 PVA 微球具有较高的比
剂主要有尿激酶(UK)、链激酶(SK)、组织型纤溶酶原激饱和磁化强度,便于在分离中应用,至今未见使用该方
活剂(t-PA). 它们大多为注射用药,副作用大、半衰期短法分离纯化纳豆激酶的报道. 本研究采用改进的悬浮聚
(UK 16 min, SK 15∼30 min, t-PA 5min),给血栓治疗带来合法制备磁性聚醋酸乙烯酯微球,经水解、氨基化修饰,
不便[1]. 再以戊二醛作间隔臂偶联配基对氨基苯甲脒,制得磁性
1987 年日本学者 Sumi 等[2]从纳豆中发现了一种具 PVA 亲和微球,用其直接对纳豆激酶粗酶液进行纯化,
有高效溶栓活性的酶,将其命名为纳豆激酶(Nattokinase, 并对纳豆激酶的吸附与解吸进行了研究.
NK). 纳豆激酶具有在体内作用时间长、无抗原性、既 2 实验
可静脉注射又能口服给药、既可预防又能治疗血栓且不
易引起出血、价格低等优点[3],分离纯化技术是限制其 原料与试剂
大规模生产的瓶颈问题. 近年来,国内外许多科研工作二乙烯苯(DVB, 用 5% NaOH 溶液清洗去除阻聚
者对纳豆激酶的分离纯化进行了研究,如盐析[4]、有机剂),过氧化苯甲酰(BPO),聚乙烯醇(PVA-1788,分析
溶剂萃取[5]、层析[6]、膨胀床吸附[7]、反胶团萃取[8]和磁纯,上海阿拉丁试剂公司),醋酸乙烯酯(VAc,经减压
性分离[9]. 传统的分离手段多采用硫酸铵或乙醇沉淀先蒸馏去除阻聚剂) ,戊二醛,浓氨水,氯化亚铁
去除杂蛋白,然后再通过层析柱进一步分离纯化,存在(FeCl2⋅4H2O),三氯化铁(FeCl3⋅6H2O),油酸(分析纯,国
步骤多、时间长