葡萄糖标准曲线的.doc

一、实训目的1、了解DNS法测定还原糖的基本原理2、通过DNS法测定还原糖的含量,建立吸光度与还原堂含量之间的线形关系,用于后续纤维素酶酶活性的测定3、通过定量操作,让学生形成准确称量、测定的理念。二、实训原理具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应。反应液颜色的强度(吸光度OD值)与还原糖量(此处即为葡萄糖量)成正比关系。三实验仪器及药品仪器:水浴锅,烧结玻璃过滤器药品:3,5-二硝基水杨酸,氢氧化钠,四水酒石酸甲钠,苯酚,无水亚硫酸钠,分析纯的葡萄糖四、实训方法1、DNS溶液的配制称取3,5-(化学纯),加水500ml,搅拌5s,水浴至45℃,然后逐步加入100ml氢氧化钠溶液(,加水溶解,定容到100ml),同时不断搅拌,直到溶液清澈透明(注意:在加入过程中,溶液温度不要超过48℃)。再逐步加入四水酒石酸甲钠91g,。继续45℃水浴加热,同时补加水300ml,不断搅拌,直到加入的物质全部溶解。停止加热,冷却到室温后,用水定容到1000ml,用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液,储存在棕色瓶中,避光保存。室温下存放7d后可以使用,有效期为6个月。(笔者注:在处理酸、碱和配制DNS试剂时,请尽可能戴上保护眼镜和乳胶手套,实验应在通风橱或通风良好的房间进行。一旦皮肤或者眼睛接触了上述物质,应及时用大量的清水冲洗)2、%葡萄糖标准液准确称取100mg分析纯的葡萄糖(预先在105℃干燥至恒重),用少量蒸馏水溶解后定容至100ml,保存于冰箱中备用。3、葡萄糖标准曲线的绘制取9支具塞刻度试管,分别按表1顺序加入各种试剂。表1试剂加入顺序空白12345678含糖量(mg)(ml)(ml)(ml)333333333将上述各试剂依次混匀后,在沸水浴中加热10min,然后立即用流动冷水冷却,每个试管加蒸馏水至25ml刻度线,充分混匀后,用空白管溶液调零点,在UV751GD紫外/可见分光光度计(540nm)处测吸光度。以葡萄糖质量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制葡萄糖标准曲线。四、结果记录与分析处理1、测定不同葡萄糖含量的OD值,建立以葡萄糖质量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标的关系式,要求用计算机作图,求出具体的线形关系式,、每根试管要求测定两次,两个数据之间的绝对差值不得超过算术平均值10%。变异系数不超过10%。3、学会分析数据,当所做线形关系不符合要求时,能作出自己的分析和判断么薛玉脉毡皂躯听茁诡诅贸伏辩景伞伪跟皮牟枪谗砰