正交设计法优选桑白皮总黄酮的提取工艺.doc

正交设计法优选桑白皮总黄酮的提取工艺
【关键词】桑白皮;总黄酮;正交设计;提取工艺
桑白皮是桑科植物桑(Morus alba L.)的干燥根皮,为一常用中药,性甘、寒,归肺经,具有泻肺平喘、利水消肿功能,主治肺热喘咳、水肿胀满尿少、面目肌肤浮肿。近年来,国内外学者对桑白皮的药理活性进行了大量研究,并找到了一系列有效成分。桑白皮主要含多种黄酮类成分,包括桑酮、桑酮醇、桑根酮、桑根酮醇、桑素、桑皮根素等。文献报道其总黄酮具有利尿、降压、降糖、镇痛、镇静、抗癌及抗HIV等作用[1]。桑白皮中总黄酮的提取方法主要有传统的水煮法、醇提法及微波辅助萃取法等方法[2,3]。为了有效开发和利用资源,本文采用正交实验对桑白皮总黄酮的提取工艺进行了研究。
1 材料与方法
仪器与试剂 TU1900紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司) 。SHBⅢ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。无水乙醇AR;三氯化铝AR;醋酸钠AR;芦丁(购于中国药品生物制品检定所);桑白皮购于药材市场。
方法
样品提取: g桑白皮粗粉9份,置于250 ml圆底烧瓶中,按表1和表2选择的因素水平在50℃下进行回流提取,趁热过滤,洗涤残渣,收集在100 ml容量瓶中,用60%的乙醇定容,作为供试品溶液。
总黄酮含量测定
标准曲线的制作:精密称取芦丁对照品10 mg,置于100 ml的容量瓶中,加60%乙醇至刻度,摇匀,即得芦丁储备液( mg/ml)。分别精密吸取芦丁储备液( mg/ml) 、、、、、 ml于25 ml容量瓶中,加60%乙醇补充至6 ml,分别加入2 ml( mol/L)三氯化铝溶液,3 ml(1 mol/ml)醋酸钠溶液,用60%乙醇稀释到刻度,摇匀,放置30 min,以试剂作空白参比液,于417 nm处测吸光度。测定结果用最小二乘法作线性回归,吸光度(A)与浓度(C)之间的回归方程 A=-(r=),~ μg/ml。
样品中总黄酮含量的测定:精密量取供试品溶液3 ml,置10 ml容量瓶中,自“加60%乙醇补充至6 ml”起,按“”项下操作,测定吸光度,由回归方程计算样品溶液的浓度及黄酮含量,结果见表2。
正交试验设计与结果:主要对乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取时间(C)及提取次数(D)等4个因素进行四因素三水平L9(34)正交试验,考察因素和水平见表1,结果见表2。表1 因素水平表水平因素 A/% B /倍 C/h D/次表2 正交实验设计及结果由表2中极差R值可知,在桑白皮总黄酮的提取工艺中,各因素对提取效果的影响程度为D>A>B>C。即提取次数>乙醇浓度>乙醇用量>提取时间。从表2中K值大小可看出,A2B2C1D3为最佳工艺,即桑白皮加10倍60%的乙醇,在50℃回流提取三次,每次1 h。
最佳工艺的验证试验:为考察上述最佳工艺的稳定性,按该工艺条件进行重复试验3次, mg/g。