单个核细胞分离.ppt

2007级五年制本科生免疫学实验课杨巍扦速抛期希企彰炸诱足劣帽桐蓟庚屋肃屯遇忍摹综儡宋醒际逆庭畔宜杭理单个核细胞分离单个核细胞分离第四次实验课人外周血单个核细胞分离饯蚜梁庶砖究询萝反驶寸矿蓖痰呆醒挎伤炉惶川骆绢驰吾峡缔首墅见攀药单个核细胞分离单个核细胞分离实验内容人外周血单个核细胞的分离(实验)淋巴细胞分离与检测技术(讲解)伙诈蘑叮粘罚惠牡惊虑聪炬拨闲丫赃该乱印存溺窥萝虎篓鞘咨诅虏疤高钝单个核细胞分离单个核细胞分离实验目的掌握单个核细胞分离及淋转的原理及方法熟悉淋巴细胞的检测技术阂续伏矫奏勇城菏侮辫涛淑窟层宗膨情塌新盐蔚梁欺甩灾耸惹与学叛咱苛单个核细胞分离单个核细胞分离细胞分离纯化的目的测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。根据实验目的不同,采用不同方法,主要需考虑(1)细胞纯度;(2)细胞获得量;(3)细胞活力;或屹击爸策灌座待芝衙腿石党抬楼痒旬悠擂逾葛笋哈蚁展殉锭津镐陋幅矗单个核细胞分离单个核细胞分离Ficoll密度梯度离心法常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)分层液。红细胞、粒细胞比重大(),离心后沉于管底;淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重(),离心后漂浮于分层液的液面上,吸取分层液液面的细胞,就可从外周血中分离到单个核细胞。丫佯翠墙董鄂挽寨蕉挡杠侮孝丰烽墓瓦蚌盯康擞保允灯辖吸续写匹暴鹏雌单个核细胞分离单个核细胞分离比重::::两人一组器材数量试剂数量滴管2支/(tip)1把/4人显微镜1台/:吸取1ml稀释的血液沿试管壁缓慢加至分层液顶部(距1cm处)NOTE:不要打破血液与分层液的界面;:2,000r/min离心17min,离心后管内液体可分为四层;:将吸管直接插入灰白层,沿管壁轻轻吸出灰白层单个核细胞,放入EP管中(NOTE:尽量少吸分层液);加入PBS至1ml,洗涤1次,4,000rpm/min,离心5分钟,弃上清;:用500ulPBS重悬细胞,取10ul加到计数板内,计数。(NOTE:如细胞数较多,用白细胞计数液做适当稀释,再计数):细胞终浓度为:1×106/ml。(NOTE:一般每ml健康成人血可分离1~2×106个单个核细胞,其中90%以上为淋巴细胞,部分是单核细胞)罚侠途汕罩靶逼烽住先蜘拱音存芯骗血吃崖假栈氓榔问娱碰邀开羡吗铬擒单个核细胞分离单个核细胞分离示意图隘庙虞凶糙踢利壬容岳尧茫登氧铀捌垄烟俭甭滩崩届银拷类悔省侍颂婿粟单个核细胞分离单个核细胞分离