微生物学实验报告.doc

实验一、培养基的制备与灭菌实验一、目的与要求1、了解各种培养基的配制及分装方法2、掌握高压蒸汽灭菌二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基:是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供细菌生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌:主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽,关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出,压力增大,沸点升高,获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性,而达到灭菌的目的。三、试剂、仪器及用具试剂:蛋白胨、牛肉膏、琼脂、葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、麦芽汁、马铃薯、黄豆芽、NaCl、NaNO3、K2HPO4、KCl、、、无水乙醇、无菌水、HCl、NaOH仪器:高压蒸汽灭菌锅、天平、电炉、烧杯、试管、量筒、玻璃棒、锥形瓶、漏斗、吸管、纱布、棉花、PH试纸、滤纸、标签纸、记号笔、防水油纸或报纸四、实验方法与步骤原料称量→溶解→(加琼脂熔化)→调节PH值→分装→塞棉塞仓扎→灭菌→摆放斜面或倒平板主要配制的培养基营养琼脂培养基:成分:蛋白胨10g,牛肉膏3g,NaCl5g,琼脂20g,蒸馏水1000ml,:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH,加入琼脂,分装于烧杯瓶内,121°C、15min高压灭菌备用。注:其他成分不变,~4g是为半固体营养琼脂。豆芽汁葡萄糖培养基:成分:黄豆芽10g,葡萄糖5g,~2g,水100ml,自然pH。制法:称新鲜黄豆芽10g,置于烧杯中,再加入100ml水,小火煮沸30min,用纱布过滤,补足失水,即制成10%的豆芽汁。配置时,按每100ml10%豆芽汁加入5g葡萄糖,煮沸后加入2g琼脂,继续加热熔化,补足失水。分装后121°C灭菌20min。查氏培养基成分:NaNO32g,K2HPO41g,,,,蔗糖30g,琼脂15~20g,蒸馏水1000ml,pH自然。制法:加热溶解,分装后121°C灭菌20min。马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):成分:马铃薯(去皮)200g,葡萄糖(或蔗糖)20g,琼脂20g,水1000ml。制法:pH自然。将马铃薯去皮、洗净、切成小块,称取200g加入1000ml蒸馏水,煮沸20min,用纱布过滤,滤液补足水至1000ml,再加入糖和琼脂,溶化后分装,121°C灭菌20min。另外,,加入1000ml培养基中,分装灭菌后可用于食品中霉菌和酵母菌计数、分离。五、高压蒸汽灭菌法1、基本原理2、高压蒸汽灭菌主要构成部分3、主要操作过程(1)加水(2)装料(3)加盖(4)加热排气(5)升压(6)保压(7)降压六、注意事项1、培养基分装时不要使培养基沾管口或瓶口2、培养基制备完毕后应立即进行灭菌3、不同成分的培养基要采用不同的杀菌条件七、思考题1、培养基配好以后,为什么必须立即进行灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的?培养基配制好后,是要是用于细胞的培养,由于空气及各种配料中的各种各样细胞非常多,如果不先灭菌,在培养是由于本底