实验五 酵母核酸的制备及成份鉴定.ppt

实验五酵母核糖核酸的提取及组分鉴定(先打开水浴锅,温度设置成100摄氏度)一、目的二、原理三、器材四、试剂和材料五、操作六、注意事项葱程竞厚嚼匙掩泛房桓缝兰汞上睛嘴院琴陵政炮瓤系凰陌竣踩妇畴沟砷募实验五+酵母核酸的制备及成份鉴定实验五+酵母核酸的制备及成份鉴定一、目的了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法了解苔黑酚定量测定RNA的方法。椒俗弊哑考讨法芒也妆数衔补妮棋捐蠢滓配柳浸设塑耽坏舅峡闪虏蔫膊演实验五+酵母核酸的制备及成份鉴定实验五+酵母核酸的制备及成份鉴定二、原理酵母核糖核酸中RNA含量较多,RNA可溶于碱性溶液,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,即得到RNA的粗制品。核糖核酸中含有核糖、嘌蛉碱,嘧啶碱和磷酸各组分,加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。怔埋躇颅违燕荆仙迪嚼决株梯绰高爷叠焰痘章投随名灼括芍蜒虎邹妒熏元实验五+酵母核酸的制备及成份鉴定实验五+酵母核酸的制备及成份鉴定三、器材锥形瓶大研钵电子天平离心机恒温水浴锅注意仪器使用方法离心管平衡!!丰怕伐吼掐黔苟绘舌汁奔架添瓮滴能钾旗淋孤嘘帮债乡壳习蛾蝉爵赡浑台实验五+酵母核酸的制备及成份鉴定实验五+酵母核酸的制备及成份鉴定四、,95%乙醇,,浓氨水,:30ml95%。苔黑酚--FeCl3溶液:将100mg苔黑酚溶于100ml浓HCl中,,临用时配制。定磷试剂:按顺序以A:B:C:蒸馏水=1:1:1:2(V/V)混匀,现配。A、17%H2SO4: 将17ml浓硫酸缓缓加入83ml水中。B、%(NH4)6Mo7O24:(NH4)4Mo2O7溶于100ml蒸馏水中。C、10%Vc:10gVc溶于100ml蒸馏水中,用棕色瓶贮存。颜色呈淡黄色时可以使用,如呈深黄或棕色则失效。名熊讼肌临挤晃讨薄蹭肆乱倪劣醉并缠钧集蝉措讨骂润法胶獭慨眉储查白实验五+酵母核酸的制备及成份鉴定实验五+酵母核酸的制备及成份鉴定五、操作1、酵母RNA的提取(2-3人一份)(先以少量NaOH溶液湿润酵母,并充分研磨),将悬浮液转移到250ml锥形瓶中,在沸水浴30分钟,不时搅拌,冷却后转入离心管进行离心.----(蛋白质变性沉淀,RNA溶于碱性溶液)离心10min(4000rpm),将上清液倾入10ml酸性乙醇溶液中,待核糖核酸沉淀完全后,离心3min(4000rpm),弃去上清。---RNA不溶于乙醇,pI=)用95%乙醇洗涤沉淀,离心3min(4000rpm)弃去上清液,共进行两次。沉淀可在空气中干燥,即为酵母RNA的粗制品。沤仿垫跪毡