4%多聚甲醛配制.doc

4%多聚甲醛固定液:
用途:进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定(动物器官经该液灌注后,然后取材,再用该液浸泡2-24小时)也常选该固定液固定。
试剂:
多聚甲醛 40g
mol/L PH 500 ml
混合后加热至60℃,搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止,冷却后加PBS 至总量1000 ml。
注固定时间24小时。
我们实验室一直沿用的4%多聚甲醛固定液(用于固定鼠或者兔的脑组织标本)的配方是:
多聚甲醛(粉末状):40g
磷酸二氢钠:
磷酸氢二钠:29g
蒸馏水:1000ml
然后一块放到三角烧瓶中,在磁力搅拌器上加热(60℃)振荡24小时。
原来一直用的挺好,配出来也很清亮。
但是这几次也是用同样的方法配出来后,在加热时是清亮的,但是瓶底有不少不溶的杂质。等不再加热,室温后,溶液就混浊了。再加热到60度又清亮了。再冷却到室温后又混浊了。不知道为啥?请高手指点一二,不胜感激
4%多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的,先加多聚甲醛和氢二钠,直接在通风情况下加热溶解,一般15到20分钟就可以,大概放置20分钟后再加二氢钠,溶解后,,最后别忘记放DEPC.
其实武汉博士德就有4%多聚甲醛固定液卖的,我们以前都是自己配,一是麻烦,二是要用到DEPC,有毒而且易挥发,还带香味,,方便便宜,省事,最主要的,他们专业点,东西好用!
你要考虑以下几过因素:
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多聚甲醛就是很难溶解,你把它放在37度温箱里若干天再去看它会有惊喜。以前用过磁力搅拌棒转一上午都不行,放在一边过几天再看就溶解了。
如果要求中性多聚甲醛就用pbs或者用磷酸氢二钠+二氢钠,如果不要求中性用水就可以啦
我要做免疫组化实验。用ABC法,DAB显色。
组织的固定液,查外文资料用的都是4%多聚甲醛/ PBS。但是实验室的老师说,,不知道是不是一样的?