心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)酶联免疫分析试剂盒预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)含量。实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗h-FABP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗h-FABP抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的h-FABP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制酶联板:一块(96孔)标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为150ng/ml,请先稀释至30ng/ml,再做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成30ng/ml,15ng/ml,,,,,,样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml,临用前15分钟内配制。如配制15ng/ml标准品:()30ng/,混匀即可,其余浓度以此类推。样品稀释液:1×20ml。检测稀释液A:1×10ml。检测稀释液B:1×10ml。检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),-。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。底物溶液:1×10ml/瓶。浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。终止液:1×10ml/瓶(2NH2SO4)。覆膜:5张使用说明书:(建议参考仪器使用说明提前预热),,全新滤纸标本的采集及保存血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。其它生物标本:请1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不
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