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实验6 微生物的计数、大小的测定和酵母菌的死活鉴别
实验目的
学习并掌握利用显微镜直接计数的基本方法。
了解并掌握酵母菌的死活鉴别染色的原理和技术。
了解测微尺的构造和使用,学习并掌握测定微生物细胞大小的方法。
实验原理
1. 两种常用计数方法,即直接计数法(血球计数板计数法)和间接计数法(平板菌落计数法)。本实验是利用血球计数板进行直接计数。
,在显微镜下进行计数,换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和,故又称为总菌计数法。
(氧化型呈蓝色,还原型呈无色),活的酵母菌染色后是透明的,而死的酵母菌则被染成了蓝色。
血球计数板的构造
9个大格
16小格
25中格
25小格
16中格
无论哪一种都是400个小格
计数室
血球计数板的分区与分格
例一
1大格=16中格
=16X25小格
=400小格
数25x4=100小格
例二
1大格=25中格
=25X16小格
=400小格
数16x5=80小格
血球计数板的构造
每个大方格面积为1mm2 ,,所以每个计数室的体积为 =
=1/4000mm3 =1/4000,000ml
计数方法:
通常数五个(或四个)中方格的总菌数,然后求得每个中方格的平均值,再乘上25或16,就得出一个大方格中的总菌数,然后再换算成lml菌液中的总菌数。
设被选作计数的中方格中的总菌数为A,菌液稀释倍数为B:
如果是25个中方格的计数板,则
1mL菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50000A·B(个)
如果是16个中方格的计数板,则
1mL菌液中的总菌数=A/4×16×104×B=40000A·B(个)
微生物细胞大小的测量是在显微镜下用目镜测微尺来进行的,但由于测量的是放大后的图像,故目镜测微尺在不同放大倍率下每格实际代表的长度也随之变化,因此,需用物镜测微尺来校正在不同放大倍率下目镜测微尺每格所代表的实际长度。
物镜测微尺是中央刻有精确刻度的载玻片,一般是将1 mm等分为100格,,即10 um,它不直接用于测量细胞大小,而是用于校正目镜测微尺的每格的相对长度。
目镜测微尺每格长度(um)=