nenRealtimePCRSupermix(SYBRgreen,withanti-Taq)使用说明书产品名称单位货号2×RealtimePCRSupermix1ml*5支MF013-012×RealtimePCRSupermix(1ml*5支)×5 MF013-052×RealtimePCRSupermix(1ml*5支)×10MF013-10【储存条件】长期保存,请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少六个月。【产品简介】本产品是采用SYBRGreenI嵌合荧光法进行实时荧光定量PCR的专用2×浓度预混液。利用HotStartTaqDNAPolymerase高温加热前,anti-Taq单克隆抗体与Taq酶结合,抑制Taq酶的聚合酶活性,从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板DNA非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。Anti-Taq单克隆抗体在PCR反应第一循环的变性步骤中已完全失活,不会阻碍之后的TaqPolymerase反应,大大提高了PCR反应的灵敏度及特异性。优化浓度的SYBRGreenI荧光染料,特异性地掺入DNA双链后,荧光信号增强,而不掺入链中SYBRGreenI染料分子荧光信号不变,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步,荧光可以在退火或延伸阶段测定。【产品组份】HotStartTaqDNAPolymerase、SYBRGreenI、dNTPs、Mg2+、ROX、反应缓冲液、稳定剂和增强剂。【适用范围】主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的定量检测。本品具有高通用性,可用于各种仪器。因产品中已经添加了ROXReferenceDye,因此可以用于需要校正荧光信号的仪器(如ABIPrism7000/7300/7700/7900HT和ABIStepOne/ABIStepOnePlus荧光定量PCR仪)。也可以用于Stratagene、Roche、Bio-RAD和Eppendorf等各种荧光定量PCR仪上采用SYBRGreen法进行基因表达分析和核酸检测等实验。【所需试剂】本产品为2×预混荧光定量PCR反应体系,使用时只需加入模板、引物和水,使其工作浓度为1×,即可进行反应。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度地减少人为误差、节约PCR实验操作时间、降低污染几率。【操作示例】按下表配制PCR反应体系:TemplateDNAX*µl2×RealtimePCRSupermix10μlPrimer1(10μM)µlPrimer2(10μM)µlddH2O补足至20µl建议的PCR条件:95°C30--40cyclesof:95°–65°°C30-60sec*.*一般情况下目标片段在300bp以下时,延伸时间30秒即可,但一部分仪器,为测定稳定的荧光,延伸时间需要大于30秒。扩增曲线散乱,或者各孔间差异较大时,请设定较长的延伸时间(45-60秒)。*:10~100ng基因组DNA,或1~10ngcDNA为参照,因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定最佳的模板使用量。另外twoStepRTPCR反应的cDNA(RT反应液)作为模板时的添加量不要超过PCR反应液总体积的1
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