慢性复合应激对大鼠胃幽门HAP1表达的影响.doc

慢性复合应激对大鼠胃幽门HAP1表达的影响
作者:廖义林廖家万刘能保李晓恒
【摘要】目的: 探讨慢性复合应激大鼠胃幽门内分泌细胞亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)表达的变化及其意义. 方法: 大鼠12只随机分为慢性复合应激组和正常对照组. 应激组动物进行6 wk的垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6 h/d)和夜间光照等慢性复合性应激试验;实验结束后,所有动物采用免疫组织化学和Western Blot等方法检测胃幽门内分泌细胞内HAP1蛋白表达的变化. 结果: HAP1在大鼠胃幽门主要表达在胃泌素细胞中. 与对照组相比,慢性复合应激组大鼠胃幽门内分泌细胞内HAP1的表达增强(P<). 结论: 慢性复合性应激大鼠HAP1在胃幽门胃泌素细胞的表达加强.
【关键词】慢性复合应激亨廷顿蛋白相关蛋白1 幽门大鼠
0引言
亨廷顿蛋白相关蛋白1(Huntingtinassociated protein 1, HAP1)因与亨廷顿病(Huntingtons disease, HD)基因产物亨廷顿蛋白(Huntingtin, Htt)相互作用而备受关注. 早期研究认为,HAP1是一个脑特有的蛋白质,广泛分布在大鼠脑神经元中,随后的研究显示,HAP1在内分泌系统中也有表达[1],但其功能尚不明确[2]. 目前还未见有文献报道慢性应激对胃幽门HAP1表达的影响. 我们采用形态学和分子生物学相结合的方法,以多种应激原对大鼠进行长达42 d的慢性复合应激,观察慢性复合应激大鼠胃幽门内HAP1蛋白含量变化,探讨慢性复合应激大鼠胃幽门HAP1表达变化可能的功能意义.
1材料和方法
(华中科技大学同济医学院实验动物中心提供)12只,体质量200 g左右,将动物随机分为:正常对照组(简称对照组,n=6);慢性复合应激组(简称应激组,n=6). 自制应激原:电动垂直转轮旋转器,其上挂载多个小的金属网鼠笼,每笼只置1只大鼠;圆锥形金属网筒捆绑器; 睡眠剥夺水池:长×宽×高为120 cm×120 cm×120 cm,池内水深50 cm,池中有多个立柱,间距10~20 cm,柱顶面积为16 cm2,离水面15 cm,单个大鼠置柱顶上;自控时间的夜间光照器.
(转速30 r/min,每次20~60 s,间隔4~10 min)、金属网筒捆绑器中捆绑、水池中睡眠剥夺,或夜间间歇性光照4种应激原中,持续6 wk;前3种白天进行,每天6 h;后者晚间进行,光照呈间歇式(每光照1~ h,间隔10~15 min);正常对照组动物平行常规喂养. 应激42 d后,两组大鼠中各取6只进行灌流固定、取胃幽门,经常规脱水、透明、石蜡包埋后,行连续切片(厚5 μm). 所有动物均依次间断选取切片,每10张取1张,每个动物共取5张,用于HAP1免疫组织化学染色. 主要步骤:兔抗HAP1多克隆抗体(1∶10000,华中科技大学李和教授馈赠)室温下孵育切片过夜;生物素化羊抗兔Ig G(1∶200,北京中山)室温下孵育1 h;SP(1∶200, 北京中山)室温下孵育1 h. 用抗体稀释液替代兔抗HAP1多克隆抗体作为阴性对照,反应呈阴性. 对胃幽门胃泌素阳性细胞进行计数.
统计学