生物技术制药 及 名词解释+2.doc

、,包括基因治疗药、基因疫苗、反义药物、、植物、:,治疗疾病是生物药物的主要功能。,具有速度快、灵敏度高、特异性强的特点。,对于许多传染性疾病来说,预防比治疗更重要。,.:(1)基因工程药物品种的开发;(2)基因工程疫苗;(3)基因工程抗体;(4)基因诊断与基因治疗;(5)应用基因工程技术建立新药的筛选模型;(6)应用基因工程技术改良菌种,产生新的微生物药物;(7)基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用;(8)利用转基因动、植物生产蛋白质类药物。现代生物技术的发展趋势主要体现在下列几个方面:①基因操作技术日新月异,不断完善。②新技术、新方法一经产生便迅速地通过商业渠道出售专项技术,并在市场上加以应用。③基因工程药物和疫苗的研究和开发突发猛进。④新的生物治疗制剂的产业化前景十分光明,21世纪整个医药工业将面临全面的更新改造。⑤转基因植物和动物取得重大突破⑥现代生物技术在农业上的广泛应用将给农业和畜牧业生产带来新的飞跃。⑦阐明生物体基因组及其编码蛋白质的结构与功能是当今生命科学发展的一个主流方向,⑧基因治疗取得重大进展,有可能革新整个疾病的预防和治疗领域。⑨蛋白质工程是基因工程的发展,它将分子生物学、结构生物学、计算机技术结合起来,形成一门高度综合的学科。⑩信息技术的飞跃发展渗透到生命科学领域中,形成形成引人注目、用途广泛的生物信息学。第二章 基因工程制药基因工程技术生产药物的优点:(1)可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽。(2)可以提供足够数量的生理活性物质以供研究。(3)可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质。(4)可以通过基因工程和蛋白质工程对内源生理活性物质进行改造。(5)可获得新型化合物,扩大药物筛选来源。基因工程药物的缺陷:生物利用度低,半衰期短;异体蛋白具有免疫原性基因工程制药基本环节上游阶段:制备目的基因→构建重组质粒→构建工程细胞下游阶段:培养工程细胞→分离纯化产物→除菌→半成品、成品检定→包装目的基因的常用制备方法化学合成法:较小的蛋白质或多肽的编码基因可以用化学合成法合成。必须知道目的基因的核苷酸顺序或目的蛋白质的氨基酸顺序。再按相应的密码子推导出DNA的核甘酸序列。用化学法合成目的基因DNA不同部位的两条链的寡核苷酸短片段,再退火成为两端形成粘性末端的DNA双链片段,然后将这些双链片段按正确的次序进行退火使连接成较长的DNA片段,再用连接酶连接成完整的基因。人工化学合成基因的限制有:⒈不能合成太长的基因⒉遗传密码的简并使选择密码子困难,⒊费用高。RT—PCR法(反转录PCR法):mRNA经逆转录合成cDNA第一条链,不需合成第二条链,在特异引物协助下,用PCR法进行扩增,特异合成目的cDNA链,用于重组,:逆转录法就是先分离纯化目的基因的mRNA,再反转录成cDNA,然后进行cDNA的克隆表达。⒈mRNA的纯化⒉cDNA第一链的合成⒊cDNA第二链的合成⒋cDNA的克隆⒌将重组体导入宿主细胞:⒍cDNA文库的鉴定:抗性基因失活法、噬菌斑颜色改变法⒎目的cDNA克隆的分离和鉴定:核酸探针杂交法、免疫反应鉴定法重组DNA导入宿主细胞导入大肠杆菌:CaCl2法;转染法导入酵母:电转化法;化学转化法;原生质转化法重组DNA导入哺乳动物细胞:显微注射法;DEAE葡聚糖转染法;DNA-磷酸钙转染法;阳性脂质体介导法;电穿孔法;细胞融合法;病毒感染法重组子的筛选与鉴定?遗传标记筛选法:抗生素抗性筛选法;α互补筛选法(蓝白斑筛选——载体含有LacZα基因,X-gal培养基,成功导入的菌落显示为蓝斑);营养缺陷型筛选法;噬菌斑筛选法?核酸分子杂交法:菌落原位杂交法;DNA印迹法;RNA印迹法?限制性内切酶图谱法:琼脂糖凝胶电泳鉴定各片段分子量,含有目的基因的为阳性克隆?DNA序列测定法?目的基因表达产物测定法大肠杆菌中的基因表达载体:是基因工程的目的和基本手段,是选用合适的载体把供体DNA(外源基因)运载到受体细胞内,从而复制扩增大量的目的DNA分子或转录表达为相应的产物。基因工程载体分为:克隆载体,转录载体,表达载体;DNA(克隆载体)→DNA(转录载体)→RNA→蛋白质→(表达载体)原核细胞的基因组特点:①染色质为环状双股DNA分子 ②