Megazyme-破损淀粉试剂盒说明书.doc

简介:小麦磨粉引起小麦粉中一定比例淀粉颗粒的物理损坏。淀粉损伤程度直接影响吸水和面团混合性能,因而具有重要的技术意义。此外,受损的颗粒迅速水合并被α-和β-淀粉酶被水解产生可发酵的糖。在传统长期发酵过程的后期,当面粉中的天然糖被酵母发酵完后,破损淀粉酶解产生的麦芽糖进一步提供发酵底物。当这种传统可发酵糖缺乏时,出现产气不足,所生产的面包体积小硬度大。用于测量破损淀粉的方法大致可分为四大类,提取法(“蓝值”),染料染色法,近红外法和酶消化法。酶消化法通常在这些方法中优先选择。酶消化法利用α-淀粉酶,β-淀粉酶或这些酶的组合。谷物和真菌α-淀粉酶制剂已被用作粗麦芽提取或粗发酵液。传统上一直使用的非特异性还原糖法测定水解程度,如铁氰化钾滴定法,或与二硝基水杨酸(DNS)反应法来测定。原理:在本方法中,利用真菌α-淀粉酶小心地处理使受损的淀粉颗粒经水合和水解成麦芽糖加和α-极限糊精。真菌α-淀粉酶处理的目的是使受损的淀粉颗粒完全溶解而完好颗粒分解极少。通过加稀硫酸终止反应,试样经过量的纯化淀粉葡糖苷酶处理,而使淀粉衍生的糊精完全降解为葡萄糖。用高纯度葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂混合物进行测定葡萄糖含量。测定值表示为淀粉(损坏)占面粉原样重量的百分比。精度:我们实验内通常能得到±3%的标准误。实验室间测试的汇总于这本小册子的7-8页。试剂盒:Megazyme公司的试剂盒可测试淀粉破损值200次。试剂盒包括测试方法和以下内容:瓶1:真菌α-淀粉酶(10mL,,℃时分析Ceralpha试剂是1000U/mL)硫酸铵溶液。4℃可存放3年以上。瓶2:淀粉葡糖苷酶(4mL,℃时分析可溶性淀粉是200U/℃)。硫酸铵溶液。4℃可存放3年以上。瓶3:GOPOD试剂缓冲液。缓冲液(48mL,),对羟基苯甲酸和叠氮化钠(%w/v)。4℃可存放3年以上。瓶4:GOPOD试剂酶。葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和4-氨基安替比。冻干粉。-20℃下可存放5年以上。瓶5:%(w/v)苯甲酸配制的D-葡萄糖标准溶液(5mL,)。室温下可存放5年以上。瓶6??:小麦粉标准样。显示小瓶标签上显示有淀粉破损度。在室温下可存放5年以上。试剂配制:。用100mM的醋酸钠缓冲液(,含5mM的氯化钙)把一份1mL的试剂稀释到20mL。用聚丙烯管分装后贮存于-20℃,在低温下使用。-20℃下可保存3年以上。(试剂1)把一份1mL的瓶2的试剂稀释至10mL。-20℃下可保存3年以上。用蒸馏水把瓶3的试剂(GOPOD试剂缓冲液)稀释至1L(溶液3)。现配现用。注:1,如果该浓缩缓冲液保存在-20℃下,将形成盐结晶,当用蒸馏水稀释至1L时必须完全溶解。2,%(w/v)叠氮钠。这是一种有毒的化学品,注意安全。4,瓶4中的试剂溶解在20毫升溶液3中,把其定量转移至装有剩余溶液3的瓶子中。用铝箔纸包裹密闭的瓶子避光保存。这是葡萄糖测定试剂(GOPOD试剂)。在2-5℃可存放3个月或在-20℃可存放12个月。如果此试剂是冻结下保存,最好把它分装。冷冻/解冻不要超过一次。新鲜配制试剂时可能是浅黄色或浅粉红颜色。4℃存放2-3个月后