酵母蔗糖酶Km值的测定目的与要求:学习米氏常数的测定原理及方法,认识底物浓度对酶促反应速度的影响。实验原理:影响酶促反应速度的因素有:底物浓度、酶的浓度、pH值、环境温度等。当环境温度、pH值和酶浓度等条件相对恒定时,酶促反应的初速度v随底物浓度增大而增大,直到酶全部被底物所饱和时达到最大速度Vmax。反应初速度与底物浓度间的关系可用米-曼氏方程式表示。将两边取倒数,采用双倒数作图法可求得Km值。操作步骤干净大试管5只编号,,,摇匀终止反应。,沸水浴5min,流水冷却,。结果与计算:在横坐标上查得酵母蔗糖酶的Km值。注意事项:微量移液器的使用。血糖管的使用。水浴温度、时间要精确。煮沸时注意安全。
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