定义:PCR技术又称聚合酶链式反应(polymerasechainreaction),是通过模拟体内DNA复制的方式,在体外选择性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术。PCR技术:PCR概念的提出1983,KaryMullis引物引物Mullis的构思DNA聚合酶DNA聚合酶特定DNA片段Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段。不耐高温。Heat-stablepolymeraseisvitaltotheeaseoftheprocess…thermusaquaticusTaqDNA多聚酶的发现1988年Saiki等从温泉( Hot spring)中分离的一株水生嗜热杆菌(thermusaquaticus)中提取到一种耐热DNA聚合酶。1、PCR技术的基本原理在微量离心管中,加入适量的缓冲液,微量的模板DNA,四种脱氧单核苷酸,耐热性多聚酶,一对合成DNA的引物,通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环的反应过程,每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍;扩增了特异区段的DNA带。一、PCR技术的基本原理和工作方式①94℃变性②50-65℃退火③72℃:20-40个PCR循环1个PCR循环PCR扩增原理引物延伸延伸5’5’3’3’变性、退火变性、退火①模板:单链或双链DNA②引物:16-30bp合成的寡核苷酸③DNA聚合酶:耐热的DNA聚合酶④底物:四种脱氧三磷酸核苷(dNTP:dATP、dTTP、dCTP、dGTP)⑤Mg2+:
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