牛奶DNA提取说明书.doc

:..en生产的牛奶细菌DNA提取试剂盒的设计是为快速提取从牛奶中发现的多种细菌DNA基因组而准备的。这个试剂盒可供从牛奶样品中发现的革兰氏阴性和革兰氏阳性菌的DNA基因组。en生产的牛奶细菌DNA提取试剂盒的设计是为快速提取从牛奶中发现的多种细菌DNA基因组而准备的。这个试剂盒可供从牛奶样品中发现的革兰氏阴性和革兰氏阳性菌的DNA基因组。DNA基因组是优先于其他蛋白细胞质中纯化得到的。DNA基因组的标准产量依牛奶样品中细菌的密度和种类不同而不同。纯化的DNA基因组可以被已检测到的限制酶完全消解,并且完全兼容PCR,可以用PCR定量和Southern印迹法分析。en所设计的树脂作为分离基质用旋转柱层层析法进行的。Norgen树脂在高盐浓度下结合DNA,在低盐和弱碱条件下释放已结合的DNA。在牛奶样品中发现的细菌的DNA基因组的提纯过程中的第一步离心牛奶样品以凝集可能存在的细菌。如果DNA是从革兰氏阳性菌或未知菌株中提取,那么凝集团块悬浮在酶切缓冲液中以供分解细菌细胞壁。下一步涉及到的溶解细菌细胞是与提供的裂解缓冲液和蛋白酶K结合,这适合各种细菌。在孵育45分钟后,将结合液和酒精加到裂解物中,并将溶液卡到核酸纯化柱上。Norgen树脂结合DNA的方式取决于离子浓度,因此,DNA将结合到纯化柱上,而大部分的RNA和消化蛋白质会倒掉或留在树脂上部。结合DNA再用提供的清洗缓冲液清洗两遍以除去所有残留杂质,用洗脱缓冲液洗脱纯化的细菌DNA基因组。说明书试剂盒说明书最大牛奶量1ml10个样本的纯化时间1小时 (每毫升10个细菌)(冻干)6mg溶菌素(粉),在室温下保存。溶菌素在到达前保存在零下20摄氏度,酶切缓冲液在添加溶菌素前保存在零下20摄氏度。冻干的蛋白K在到达前和复原后应该保存零下20摄氏度。这些试剂在未开封前可保质至少1年。预防措施和免责声明这个试剂盒是专门为科研设计的,并不为人类和诊断使用。使用试剂时确保穿着合适的实验服、戴一次性手套、护目镜。有关更多信息,请参考合适的材料安全数据表(MSDSs)。这些可以在F文件。结合缓冲液和清洗液1中含有胍盐,使用时要小心。胍盐再与漂洗剂结合时形成高活性化合物,因此必须妥善处理这些试剂。提供试剂和设备·微型离心管·台式微量离心机·微量移液枪·550C孵化箱·370C孵化箱(只为革兰阳性菌)·溶葡球菌酶(只可选革兰阴性菌)·96-100%的酒精·。如果没有可变速离心机,可以用一台固定转速的离心机,不过可见产量下降。(未知或格兰阳性菌热到370C)