辅酶四氢叶酸的合成及其活力测定 摘要在利用基因工程菌表达的丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)酶法制备L-丝氨酸的过程中,SHMT需要四氢叶酸作为辅酶。研究了常压氢化法、加压氢化法、硼氢化物还原法及连二亚硫酸钠还原法等制备四氢叶酸,并优化了常压氢化法、硼氢化物还原法的工艺条件。常压氢化法的产品已用来代替进口试剂作为酶促反应的辅酶,但硼氢化物还原法成本最低,且能合成满足酶促反应要求的产物。四氢叶酸在制备过程和使用中,均极易氧化破坏,因此需提供严格的抗氧化条件。关键词叶酸;四氢叶酸;相对活力;硼氢化物;催化氢化SynthesisofCoenzymeTHFAandDeterminationofItsRelativeActivitySunJin WuWutong ChenZhihong(BiochemicalPharmaceuticsCollege,ChinesePharmaceuticalUniversity,Nanjing,210009)Abstract SHMTenzymaticpreparationofL-serrequiresTHFAasitscoenzyme,-pressure,,,,anti- Folicacid,Tetrahydrofolicacid,Relativeactivity,Hydroborate,Hydrogenation L-丝氨酸(L-serine,L-Ser)是一种含羟基的天然氨基酸,它在医药、化工等领域具有广泛的用途。L-丝氨酸的生产方法有发酵法、化学合成法、丝胶水解法和酶法等。本实验室已建立了含GlyA的重组菌,其表达的丝氨酸羟甲基转移酶(serinehydroxymethyltransferase,SHMT)可催化甘氨酸(glycine,Gly)与甲醛反应合成L-丝氨酸。在酶促反应过程中,SHMT需四氢叶酸(Tetrahydrofolicacid,THFA)作为辅酶。由于市售四氢叶酸价格昂贵,为降低酶法生产L-Ser的成本,需研究价廉的四氢叶酸合成方法。四氢叶酸主要由叶酸(Folicacid,FA)还原而得,具体的方法有二氢叶酸还原酶法
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