显微镜直接计数法.doc

。。。。实验原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上,于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。图9-1血球计数板构造(一)图9-2血球计数板构造(二)1血细胞计数板;2盖玻片;3计数室用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。血球计数板是一块特制的载玻片,其上由四条槽构成三个平台;中间较宽的平台又被一短槽隔成两半,每一边的平台上各自刻有一个方格网,每个方格网共分为九个大格,中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如下图。计数室的刻度一般有两种规格,一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格;另一种是一个大方格分成16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格,但无论是哪一种规格的计数板,每一个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为1mm,则每一个大方格的面积为1mm2,盖上盖玻片后,,。计数时,通常数五个中方格的总菌数,然后求得每个中方格的平均数,再乘上25或16,就得出一个大方格中的总菌数,然后再换算成1ml菌液中的总菌数。实验器材酿酒酵母血细胞计数平板,显微镜,盖玻片,无菌毛细管等。实验步骤一、:以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。:在加样前,先对计数板的计数室进行镜检。若有污物,则需清洗,吹干后才能进行计数。:将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片,再用无菌的毛细滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴,让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室,一般计数室均能充满菌液。:加样后静止5min,然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上,先用低倍镜找到计数室所在位置,然后换成高倍镜进行计数。若计数区是由16个中方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个中方格(即100小格)的菌数;如果是25个中方格组成的计数区,除数上述四个中方格外,还需数中央l个中方格的菌数(即80个小格);如菌体位于中方格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差;如遇酵母出芽,芽体