基因工程与蛋白质工程.ppt

第3篇:遗传信息第五章:基因工程与蛋白质工程第一节DNA重组和基因工程基因工程亦称遗传工程,即利用DNA重组技术的方法,把DNA作为组件,在细胞外将一种外源DNA(目的基因)和载体DNA重新组合连接(重组),最后将重组体转入宿主细胞,使外源基因DNA在宿主细胞中,随细胞的繁殖而增殖(cloning,克隆),或最后得到表达,最终获得基因表达产物或改变生物原有的遗传性状。一、DNA重组的技术路线二、基因工程的应用与前景三、binantDNAmoleculeCloning+1、目的基因的制备2、载体的构建3、目的基因与载体的重组4、重组体导入宿主细胞进行扩增5、克隆基因的鉴定Ti质粒结构植物冠瘿瘤pBR322质粒的结构以噬菌体为载体进行DNA克隆DNA用限制性内切酶除去中间一段与外源DNA连接重组载体的体外包装带有外源DNA的噬菌体太小不能被包装头部前体多联体DNAA蛋白COSCOSCOS成熟的颗粒在宿主细胞内进行DNA的装配过程噬菌体感染大肠杆菌的途径DNA重组体的筛选载体特征的直接筛选菌落的原位杂交免疫学方法pBR322质粒结构如果外源DNA插入,氨卞青霉素抗性基因失活如果外源DNA插入,四环素抗性基因失活原位杂交法筛选DNA重组体图解复印至硝酸纤维素膜上用NaOH菌体裂解DNA变性杂交放射自显影32P-cDNA与放射性cDNA杂交的菌落的斑点细菌菌落单链DNA结合到膜上Southern印迹法DNA分子限制片段限制性酶切割琼脂糖电泳转移至硝酸纤维素膜上与放射性标记DNA探针杂交放射自显影带有DNA片段的凝胶凝胶滤膜用缓冲液转移DNA吸附有DNA片段的膜