山莨菪碱治疗兔创伤性急性肺损伤分子生物学机制的实验研究.doc

山莨菪碱治疗兔创伤性急性肺损伤分子生物学机制的实验研究                 作者:简文,樊爱琳,尹文,戚好文,柏长青【摘要】 目的:探讨山莨菪碱(654??2)对家兔创伤性急性肺损伤(ALI):采用创伤性急性肺损伤模型,将家兔随机分为对照组(CG),肺损伤组(IG)和治疗组(EG),,2,3,4h各放血处死6只,留取支气管肺泡灌洗液(BALF),分离肺泡巨噬细胞(PAM),用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)和RT??PCR法检测PAM中NF?拨?B的活性变化及TNF?拨?mRNA的表达水平,用ELISA法检测BALF上清中TNF?拨梁?IL??:IGNF?拨?B活性、TNF?拨?mRNA表达及TNF?拨?,IL??8含量于模型建立后1~4h内均明显高于CG(P<);EG经山莨菪碱治疗后上述指标与IG相比均有明显下降(P<,P<).结论:山莨菪碱对ALI有治疗作用,此作用与其对NF?拨?B活性及TNF?拨?mRNA,TNF?拨?,IL??8表达抑制有关.【关键词】 山莨菪碱;创伤;急性肺损伤;核因子?拨?B;细胞因子   0引言   TNF?拨恋认赴?因子的释放及其介导的炎症反应在急性肺损伤(acutelunginjury,ALI)的发生、发展中起重要作用[1].NF?拨?B是一种基因转录调节蛋白,通过调控TNF?拨梁桶紫赴?介素等细胞因子的转录,在炎症、免疫、急性期反应中发挥重要作用[2].山莨菪碱是一种植物药,在休克、全身炎症反应综合征的治疗中,显示出一定的保护作用[3].此类药物在AIL的防治中也有一定的价值,但作用机制尚不明了[4].我们采用分子生物学技术对山莨菪碱治疗创伤性ALI时NF?拨?B活化、TNF?拨?mRNA表达及BALF中TNF?拨?,IL??8的释放进行研究,探索其治疗创伤性ALI的可能机制.   1材料和方法   ,雌雄不拘,~,(O111:B4,LPS,Sigma);NE??PERTM试剂盒(Pierce);GelShiftAssay试剂盒(Promega);γ??32PATP(北京亚辉生物医学工程公司);TrizolReagent(Gibco);RNAPCR试剂盒(大连Takara);ELISA试剂盒购自本校基础部免疫学教研室.   ,随机分为正常对照(Controlgroup,CG)、创伤性急性肺损伤(Injurygroup,IG)和山莨菪碱治疗(Experimentalgroup,EG)3组,,EG动物LPS注射联合撞击,建立创伤性急性肺损伤模型,CG不做胸壁撞击,,随后以1mg(kg/h)维持,CG和IG分别予以等量生理盐水,,2,3,,用生理盐水分两次行支气管肺泡灌洗(bronchoalveolarlavagefluid,BALF),5mL/次,共10mL,回收率70%