细胞固定化生产纳豆激酶的研究及细胞固定化反应器的设计.pdf

论文学位细胞固定化生产纳豆激酶的研究及细胞固定化反应器的设计郭晓燕‘丑鸳指导教师姓名:盆签』匹煎拯辈撂申请学位级别:亟±专业名称:邀生塑堂论文提交日期:焐旦论文答辩日期:闵斓臼学位授予单位和日期:直昌太堂逝生旦旦答辩委员会主席:分类号密级编号评阅人:年日
细胞固定化生产纳豆激酶的研究及细胞固定化反应器的设计要摘本文对纳豆菌细胞固定化技术生产纳豆激酶的优势、纳豆激酶的活性测定、纳豆激酶的提取、纯化、分子量的测定、细胞固定化装置及反应器的设置五个方面进行了研究。研究结果表明,纳豆菌细胞固定化比游离细胞产酶量高,第一批次酶活是游离细胞的倍,高产酶量可以维持批次。本文采用纤维平板法测定纳豆激酶的活性,用美蓝染色法对传统的纤维平板进行了改进,并以尿激酶为标准,测定纳豆激酶发酵液酶活为痬。本文采用了等电点法、盐析法、有机溶剂沉淀法,耐同定化细胞发酵液中的纳豆激酶进行了提取。发现丙酮沉淀法的效果最好,酶活收率最高,但是在纳豆激酶的干燥过程中,酶活的收率不如盐析法。丙酮沉淀粗酶液经冷冻干燥后获粗燥后获粗酶,单位酶活为酮沉淀法制得的一次层析冻阜鄣拿富钍章饰%,而经盐析法制得的层析冻干酶粉的酶活收率为在纳豆激酶的进一步纯化中发现,纳豆激酶经一次层析后单位酶活为痪郾0纺旱缬窘峁砻鳎啥辜っ赶嗝敢旱囊淮尾阄鎏醮多,仍含有杂质。尾阄龅哪啥辜っ冈诜肿恿Γ挥幸惶跆醮本文对纳豆菌细胞固定化生物反应器做了仞步的设计研究,,加快了细胞固定化速度,减少了操作过程的污染。以上的实验及设计,为纳豆激酶的工业化生产提供了重要依据。关键词:固定化细胞纳豆激酶纯化固定化细胞生物反应器酶,单位酶活为痬,。发酵液经丙次痬,二次层析后纳豆激酶纯度虽得到了提高,但是酶活仅为具有明显的纤溶活性,说明经二次层析后已经获得了电泳纯的纳豆激酶。ァ痬。
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第一章绪论啥辜っ傅难芯拷、化学修饰的血纤溶酶。链激酶、尿激酶∞作为第一溶栓剂的发展血栓栓塞性疾病正严重地危害着人类的生命和健康,尤其心脑血管栓塞性疾病是危害中、老年人健康最严重而又常见的疾病之一。血栓症日渐成为死亡率占首位的病症【縪溶解血栓是治疗这一类疾病的重要手段。因此,对溶栓药物的研究已被广为重视。当今用于临床治疗的药物包括链激酶;⒛激酶;⒆橹脱O巳苊冈せ罴⒌チ茨蚣っ感脱O巳苊冈せ钇險代溶栓药物在临床上广为应用,但它们均对纤维蛋白无特异性选择作用,容易引起全身性纤溶激活并伴有出血倾向、半衰期短等缺点。同时还具有抗原性,并有过敏性反应。作为第二代纤溶药物的甈」芏韵宋鞍子泻芨叩难≡裥裕但临床上为了取得较好的溶栓效果而应用大剂量/佣糠质チ对纤维蛋白的选择性,因此依旧会导致出血等副作用。此外,临床上试用的第二代新药还有茴香酰纤溶酶原一一链激酶复合物籄⒅刈榈チ茨蚣っ籸甈和葡激酶。但韵宋鞍椎难≡裥并未能证实;.溶栓效果慢且易造成出血;葡激酶虽然具有较强的纤维蛋白选择性,但由于其为细菌成份,因此也具有抗原性。尽管第二代溶栓药物的纤溶作用优于第一代溶栓药,但它们依然具有纤维蛋白特异性差、体内半衰期短、生产成本高、需大剂量连续用药等缺点。鉴于此,开发新型溶栓药物己成为重要的研究课题之一。目前,纳豆激酶魑8咝О踩ú⒖芍苯尤芙纤维蛋白的纤溶酶,正在成为当今溶栓药研究的焦点Ⅲ。年,等‘首次报道在纳豆存在着一种具有强烈纤溶作用的酶一一纳豆激酶。该酶能显著地溶解体内外血栓,明显缩短优球蛋白的溶解时间,,纳豆激酶是一种很有潜力的新溶栓药物,在日本已得到广泛深入的研究,在我国还刚刚起步,它将成为