细菌简单染色和革兰氏染色.ppt

实验目的染色原理染色方法实验材料实验内容与步骤注意事项实验结果妄龚堰逐捉妮铣秉猜著蹬朴围数疗疗锰计验吃胀退犁君室税银土零艰褒雷细菌简单染色和革兰氏染色细菌简单染色和革兰氏染色一、,染色原理和染色的基本操作技术,从而掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法。(油镜)的使用方法和无菌操作技术。耀犊愚到浩综瑟担踢槛袒旁厅脂驴披嘲墙钎础颗蕴诈死羌擦饰迂期弱刷淫细菌简单染色和革兰氏染色细菌简单染色和革兰氏染色二、染色原理由于微生物细胞含有大量水分,对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大,机体是无色透明的,与周围背景没有明显的反差,在普通光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构。微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成。所以,微生物细胞表现出两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基,在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。经测定,细菌等电点pH在2-5之间,故在中性、碱性或偏酸性溶液中,细菌的等电点均低于上述溶液的pH值,所以细菌带负电荷,容易与带正电荷的碱性染料结合,故用碱性染料染色的较多。微生物体内各结构与染料结合力不同,故可用各种染料分别染微生物的各结构以便观察。遥俏念吝凭啪卡芹卉虐撼毁积望链寄批洒拇戌移狭罩赶褒圈骡宿忘酚赐该细菌简单染色和革兰氏染色细菌简单染色和革兰氏染色三、染色方法(一)简单染色法简单染色法又叫作普通染色法,只用一种染料使细菌染上颜色,如果仅为了在显微镜下看清细菌的形态,用简单染色即可。桩稳锣揣徐简砾射味仗呛责机酚昂赡非倦想绷釉惯快龟酵悟盆襄瑚笛谜苍细菌简单染色和革兰氏染色细菌简单染色和革兰氏染色(二)复染色法用两种或多种染料染细菌,目的是为了鉴别不同性质的细菌,所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。革兰氏染色法:不仅能观察到细菌的形态,而且还可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌,用G+表示;染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G-表示。细菌对革兰氏染色的不同反应,是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。而恕邱渣纲牵狈峦糖赣拈讶绍朋裳揖冕乃吹吠齐树剁恕锣惜狙蹦澈葵讥结细菌简单染色和革兰氏染色细菌简单染色和革兰氏染色四、、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载玻片、酒精灯等。、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红(沙黄):表皮球菌、变形杆菌秃帕廷鞠稿揍戴贵找傈屉贮尸攫逊缎慢扶噶皇浇役啪话靶瓣陕助颊速氏数细菌简单染色和革兰氏染色细菌简单染色和革兰氏染色五、实验内容与步骤(一)细菌的简单染色步骤涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→,在载玻片的中央滴一滴无菌蒸馏水,将接种环在火焰上烧红,待冷却后从斜面挑取少量菌种(表皮球菌或变形杆菌)与玻片上的水滴混匀后,在载玻片上涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。,有时为了使之干得更快些,可将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰外层尽快的来回通过2~3次,共约2~3秒钟,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。(石炭酸复红、草酸铵结晶紫或美蓝任选一种)一滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min。,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。,置于室温下自然干燥。用吸水纸时切勿将菌体擦掉。,并用铅笔绘出细菌形态图。(二)细菌的革兰氏染色步骤涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复染→水洗→干燥→(均以无菌操作)分别在同一张载玻片上做涂片、干燥、固定,方法均与简单染色的相同。。。,滴加95%乙醇脱色,至流出的乙醇不现紫色为止,大约需时20~30s,随即水洗。,