叶酸检测方法研究进展.doc

叶酸检测方法研究进展1942年,Stkstad首次地合成了叶酸,并阐明了叶酸的化学结构。半个世纪了,叶酸一直是学术界的热点。的证实,妇女孕前或妊娠早期叶酸是神经管畸形的病因,1,。叶酸与同型半胱氨酸代谢关系密切,对预防心血管疾病的的生物学意义…1942年,Stkstad首次地合成了叶酸,并阐明了叶酸的化学结构。半个世纪了,叶酸一直是学术界的热点。的证实,妇女孕前或妊娠早期叶酸是神经管畸形的病因,1,。叶酸与同型半胱氨酸代谢关系密切,对预防心血管疾病的的生物学意义,2,。叶酸是一组化学结构相似,生化特性相近的化合物统称,是由喋啶、对氨基苯甲酸和1个或多个谷氨酸而成。食物中的叶酸绝大多数是以喋酰多谷氨酸(或称多谷氨酸叶酸)的的。食物叶酸经小肠粘膜细胞内特异叶酰多谷氨酸水解酶的作用,水解为喋酰单谷氨酸(或称单谷氨酸叶酸,PteGlu)后吸收。吸收后的单谷氨酸叶酸一又转变为多谷氨酸叶酸,在肝脏、红细胞及组织细胞内贮存,其余则以单谷氨酸叶酸的分布于血浆、组织液、胆汁及尿液中。肝脏的叶酸浓度是血浆的几百倍,但其单谷氨酸叶酸浓度与血浆相近。叶酸以8种辅酶于生物体内,为一碳的载体嘌呤、嘧啶等物质的合成。用于评价人体叶酸营养状况最常用的检测指标是红细胞叶酸及血清或血浆叶酸。,叶酸的检测方法已有多种,微生物法、同位素放射免疫法的使用最为。一、微生物法微生物法是检测生物体内叶酸的经典方法,通常所用的微生物有干酪样乳酸杆菌()、粪链球菌和啤酒小球菌属。此3种微生物同叶酸的敏感度不同。粪链球菌只对非甲基化叶酸敏感,如PteGlu、二氢叶酸(DHF)和四氢叶酸(THF),可用于鉴别分析叶酸在不同检测物的分布。、含2或3个谷氨酸叶酸(PteGlu2、PteGlu3)及其还原型衍生物均敏感,是3种微生物中反应谱带最宽的,最为常用的菌种。它对含7个谷氨酸叶酸(PteGlu7)的敏感度很小,约为对PteGlu敏感度的1,,。但有,、PteGlu5、,、,、,,,对某些的多谷氨酸叶酸的敏感度随培养的延长而,其机理有两种:其一,微生物在培养过程中合成水解酶,随培养延长,水解酶产量,长链谷氨酸水解断裂;其二,细菌在培养过程中细胞壁对多谷氨酸叶酸的通透性。,,但如检测物中含有多谷氨酸叶酸须将样品在检测前加入多谷氨酸叶酸水解酶水解,使叶酸均转变成单谷氨酸叶酸,否则检测结果代表其叶酸总含量。传统的微生物学检测方法是试管法,操作繁杂。1987年,Nean和Tsai,3,在食物叶酸分析过程中,对传统的方法做了改良,将96孔酶标板和全自动酶标板读数仪(酶标仪)引进方法中,大大了试剂的消耗,缩短了加样及人工读取检测结果的。,及对抗生素耐药菌株,还可使检测方法简化。另有证实,4,,(AT7469)可使检测物培养从36,48小时减至18小时。′Brin和Kelleher,5,(NIB10463)对血清及红细胞叶酸检测,结果与传统的微生物法检测结果呈线性(r值分别为0.