,、时间短,获得尽可能多的目标组分通常包括以下考虑因素:、、干燥和保存。物理、、、、带电的情况、离心沉降的表现、在各种凝胶、、。真核细胞的亚细胞器a. 动物细胞; b. 植物细胞在显微镜下通过显微操作系统对欲选取的材料(组织、细胞群、细胞、细胞内组分或染色体区带等)进行切割、分离,获取均匀性很好的目标细胞(homogeneous cell)。激光捕获显微切割技术laser-capture microdissection,LCMA:大鼠子宫上皮H & E-染色的冰冻切片样品B:人空肠Cy2-Ab抗Cytokeratin上皮细胞冰冻切片样品C:石腊包埋H & E-染色的前列腺样品D:人血液中Giemsa-染色的白细胞样品E:大鼠小神经元细胞Nissl-染色的样品F:小鼠HistoGene-染色的肾小球冰冻切片样品植物细胞、细菌细胞、真菌细胞温和酶解法血细胞、组织培养细胞温和溶胀法组织及各种细胞温和自溶法化学与生物化学法细菌细胞或病毒温和冷热交替法微生物细胞、含有细胞壁的细胞剧烈压榨法悬浮细胞剧烈超声波处理法细菌细胞、组织培养细胞温和反复冻融法物理法固体组织细胞、微生物细胞剧烈组织捣碎法(匀浆法)固体组织细胞、微生物细胞剧烈研磨法机械法应用对象剧烈程度细胞破碎方法细胞破碎方法细胞破碎的目的使被分离的分子充分地释放到溶剂中,与细胞中其它化合物和生物大分子分离,并由固相转入液相,并尽可能保持原有的生物活性。将目标分子从细胞内的生理状况转入外界特定的溶液中的过程。水溶液提取稀盐和缓冲溶液对蛋白质等生物大分子的稳定性好、溶解度大。考虑的影响因素如下:(即离子强度):在低离子强度的溶液中绝大多数蛋白质和酶都有较大的溶解度,此为“盐溶”现象;中性盐的浓度增加至一定时,蛋白质的溶解度又逐渐下降,直至沉淀析出,称为“盐析”现象。:蛋白质、酶与核酸的溶解度和稳定性与pH值密切相关,一般提取溶剂的pH应在蛋白质和酶的稳定范围内(pH=6~8),通常选择在偏离等电点的pH条件。例如胰蛋白酶为碱性蛋白质,常用稀酸提取。(待续)
生物分析化学样品处理创新 来自淘豆网m.daumloan.com转载请标明出处.
