免疫组化实验步骤.doc

免疫组化操作步骤一、实验原理与意义免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。(一)、(二)、(―):NaC137mmol/L,,,.(CB,,1000ml):柠檬酸三钠3g,。():&8226;2H2O,用10mmol/,():在800ml水中溶解121gTris碱,,加水1000ml。:%胰蛋白酶:%CaCl12()配制。%胃蛋白酶液:。%甲醇―H2O2溶液:用30%H2O2和80%:(–)等量混合b油和TBS(PBS)–,适用于荧光纤维镜标本;-(三)、操作流程1、脱蜡和水化:脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。a组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟,更换二甲苯后在浸泡10分钟b无水乙醇中浸泡五分钟c95%乙醇中浸泡五分钟d75%乙醇中浸泡五分钟2、抗原修复:用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片:A抗原热修复a高压热修复在沸水中加入EDTA()().盖上不锈钢锅盖,但不能锁定。将玻片置于金属染色加上,缓慢加压,是玻片在缓冲液中浸泡五分钟,然后将盖子锁定,小阀门将会升起来。10分钟后除去热源,置入凉水中,当小阀门沉下去后打开盖子。此方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。()至95℃左右,放入组织芯片加热10-15分钟。()至沸腾后将组织芯片放入,断电,间隔5-10分钟,反复1-2次。适用的抗原:Bcl--------%%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热37℃,消化时间约为5-30分钟。适用于被固定遮蔽的抗原:-erB-