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性别鉴定计篇一:性别鉴定PCR性别鉴定实验摘要:人类y染色体上特异性重复序列(humany-chromosomespecificrepetitiveDNAfamilysequence)是一种重复性很高的特异性序列,引物能在人类广大的基因组中对它进行特异性识别,因此,它是良好的PCR材料。本实验通过对人黏膜细胞的DNA提取、基因组DNA制备、PCR扩增y染色体上特异性重复序列、PCR产物的电泳检测的方法实现人的性别鉴定。通过此次实验,我们得到了预期结果,只有极少数因实验操作等人为失误导致实验与预期不符的情况发生,总之,用PCR技术扩增y染色体上特异性重复序列的方法是可靠的。关键词:基因组DNAPCRy染色体上特异性重复序列电泳检测引言PCR(PolymeraseChainReaction)又称聚合酶链式反应,它是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。鉴定性别方法有很多,巴氏小体观察法、染色体分型技术都可以对人的性别进行鉴定,但是染色体分型需要专门的技术和人才,巴氏小体鉴定人的性别准确率低,而且无法鉴别XXY、X0核型的性别。而PCR的方法操作简单,准确率高。由于Y染色体是区分性别的本质,PCR可以很简便地从基因组DNA中直接获得Y染色体DNA进行分析鉴定。本实验就是通过PCR技术扩增y染色体上特异性重复序列来实现性别鉴定。人类及哺乳动物的性别决定和分化是一个复杂的过程,涉及已知和未知的多个基因。SRY基因是人类及已知许多哺乳动物中一段Y染色体特异的保守序列,人类SRY编码区全长615bp。该基因的突变将导致XY染色体女性化(特纳氏综合征);而含有该基因的染色体片段如果易位到X染色体,则导致XX男性综合征。但是由于人类的基因组太大,有700多MB,引物要从700多MB的序列中识别615bp的序列十分困难,因此,本实验选取的是一种更容易被引物识别的序列——y染色体上特异性重复序列(humany-chromosomespecificrepetitiveDNAfamilysequence)来进行PCR扩增。电泳是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极移动的现象。各种生物大分子在一定pH条件下,可以解离成带电荷的离子,在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质,它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中,其中的电离子会发生移动,移动的速度可因带电离子的大小、形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异,就可以区别各种大小不同的分子。因而,凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化DNA片段,是分子生物学的核心技术之一。综上,本实验通过对人口腔黏膜细胞的DNA提取、基因组DNA制备、PCR扩增y染色体上特异性重复序列、PCR产物的电泳检测的方法实现人的性别鉴定,取得了良好的效果。:人口腔黏膜细胞实验试剂:ddH2O、10×Buffer、dNTP()、PrimerF(10μM)、PrimerR(10μM)、Taq酶(5U/μL)、TAE、EB、agarose,:离心机、水浴锅、涡旋振荡器、微量移液器、不同类型的枪头、、金属浴锅、制胶槽、制胶板、(1)取一高压过的Ep管,做好标记;(2)取60μL细胞裂解液至一个Ep管中;(3)先用水漱口,然后用消毒牙签(钝头)刮取口腔上皮,弃去第一次刮取物,保留第二刮取物;(4)将消毒牙签(钝头)放于Ep管细胞裂解液中快速转动,释放细胞;(5)50℃水浴锅保温20min。(6)在等待过程中建立PCR反应体系。即取一个干净的PCR管,在冰浴中,依序加入表1中的成分(除了模板以外其他都加好)。另外要设置阴性对照和阳性对照。阴性对照不加模板,阳性对照加入男性基因组DNA。(7)95℃金属浴保温除模版外PCR反应体系10min。(8)12,000rpm离心除模版外PCR反应体3min,获得DNA溶液。(9(10)将样品放入PCR仪中,按照表2的PCR反应条件进行目的片段DNA扩增。%的琼脂糖凝胶电泳(1)正确组装1套制胶槽、制胶板、样品梳(使用2排25齿的梳子)。(2)取80mL1×TAE至250mL干净红盖瓶中,,倒入瓶中,轻旋混匀。轻旋瓶盖,放入微波炉中加热沸腾3~4次,至溶液澄清无颗粒。(3)待溶液冷却至60℃左右,加入40μL1mg/mL的溴化乙锭(EB)溶液,,轻旋混