脯氨酸含量测定.doc

脯氨酸含量测定逆境胁迫下植物体脯氨酸含量测定【实验目的】。。【实验原理】(干旱、盐碱、热、冷害、冻害),植物体内脯氨酸含量会显著增加,并且积累指数与植物的抗逆性有关,因此脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。。酸性条件下,茚三酮和脯氨酸反应生成稳定的红色化合物,产物在520nm波长下具有最大吸收峰。用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中,然后用酸性茚三酮加热处理后,溶液即成红色,再用甲苯萃取,则色素全部转移至甲苯中,颜色的深浅即表示脯氨酸含量的高低。【实验材料】:小麦幼苗:(1)对照(2)100mM、200mMNaCl处理48h(3)5%、15%PEG-:3%磺基水杨酸;冰醋酸;甲苯;%酸性茚三酮溶液;脯氨酸母液50μg/:天平,烧杯,分光光度计,研钵,容量瓶,具塞试管,移液管,胶头滴管,水浴锅【实验内容】(2)分别吸取1ml系列标准浓度的脯氨酸溶液于6个试管中,加入1ml水、1ml冰乙酸、,的酸性茚三酮,于沸水浴中加热30min。(3)冷却后准确加入4ml甲苯,振荡30S,静置片刻,使色素全部转至甲苯溶液。(4)轻轻吸取各管上层甲苯溶液至比色杯中,以甲苯为空白对照,于520nm进行比色。(1),%磺基水杨酸试管中,沸水浴中提取10min。(2)吸取1ml上清于另一试管中,加入1ml水、1ml冰乙酸、,的酸性茚三酮,混合液于沸水中显色30min。(3)冷却后加入4ml甲苯,摇荡30S,萃取完全后用吸管轻轻吸取上层红色甲苯溶液于比色杯中,以甲苯为空白对照,在520nm比色。【实验结果】查标准曲线,得脯氨酸含量c(µg)脯氨酸含量(µ-1),c×(v,a),w其中V为提取液总体积ml;a为测定液体积ml;W为样品质量g。(µg/mL)%-%-,得到的几种处理的脯氨酸含量分别为:脯氨酸浓度质量脯氨酸含量处理OD520(µg/mL)(g)(µg/g)%