膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞).doc

膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)胞浆蛋白/核蛋白/膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)(Catalog#DBI-1021;DBI-1022;Storekitat4?)描述:本试剂盒提供了蛋白抽提试剂A~蛋白抽提抽提试剂B~蛋白抽提试剂C三种具有独特组分的缓冲液。所有试剂采用PIPES缓冲系统。通过实验~可以得到:细胞胞浆蛋白,其中含有含有可溶性的骨架蛋白,,细胞膜蛋白,其中包含细胞质膜蛋白和细胞器膜蛋白,,细胞核蛋白,其最后剩余的沉淀为难溶性的胞质骨架和纤维蛋白。提取方法简单~可靠~快速。获得的各种部分蛋白纯度高~可用于PAGE电泳、WesternBlot、免疫共沉淀、EMSA等后续研究。该试剂盒所得到的蛋白溶液适合用Bradeford法,DBI生物产品:DBI-1045,1046,蛋白定量和BCA方法,DBI生物产品:DBI-1047,1048,进行定量。II试剂盒组分:::•打开试剂盒后~于4度保存蛋白抽提液,于-20度保存蛋白酶抑制剂~样品缓冲液,6×,。•使用前,加10ul的蛋白酶抑制剂于1ml蛋白抽提试剂A中~使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为ExtractionBufferMix——A),加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂B中~使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为ExtractionBufferMix——B),加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂C中~使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为ExtractionBufferMix——C),试剂盒组分DBI-1021DBI-1022包装50次100次颜色蛋白抽提试剂A蛋白抽提试剂A-1蛋白抽提试剂B蛋白抽提试剂C混合型蛋白酶抑制剂(100×)SDS-PAGE样品缓冲液(6×)50ml500ul50ml25ml1支5支100ml1000ul100ml50ml1支10支棕色棕色棕色棕色棕色绿色•在试验过程中确保抽提混合物始终保存在在碎冰中。•需要自己提供的试剂:90%acetone~PBS抽提所使用的蛋白抽提试剂使用量抽提步骤?.-3次。:如果样品为悬浮细胞,蛋白抽提试剂的使用量依赖于培养细胞的湿重或细胞数量。a)转移悬浮细胞培养液到一个预先称重的离心管中~简单的离心。b)弃去上清培养基~称量其重量~计算出悬浮细胞的重量。c)按照实验II进行下面的实验。如果样品为单层贴壁细胞:蛋白抽提试剂的使用量取决于培养细胞的器皿大小或细胞数量。a)按照实验III进行下面实验。?.~加入到已经清洗好的细胞沉淀中。用移液器小心吹打~使细胞悬浮。~并且轻微振荡~时间为大约10分钟。使95-100%的细胞胞浆流出细胞。注意:在实验过程中~每个步骤的时间要保持连贯性。~4度离心10分钟。。记录上清的体积~此即为胞浆蛋白。,标记为上清1,。于-70?保存该样品。.~加入到沉淀中。用移液器小心吹打~使沉淀悬浮。~并且轻微振荡~时间为大约30分钟。~4度