利用苹果渣制备益生菌制剂及研究.pdf

陕西科技大学硕士学位论文利用苹果渣制备益生菌制剂的研究姓名:李瑛申请学位级别:硕士专业:生物化工指导教师:吕嘉枥201105利用苹果渣制备益生菌制剂的研究摘要农用益生菌制剂在改善动物体内微生态平衡、预防疾病、促进生长及净化养殖环境等方面发挥着重要作用。目前,各益生菌制剂多采用成分复杂、价格昂贵的专用培养基培养。本研究以鲜果渣为主原料,用酵母菌、乳酸菌、枯草杆菌和曲霉菌益生菌群为出发菌种,再复配以其他物质,采用有益微生物发酵果渣,以期培养出高浓度的益生菌菌体,同时提高果渣蛋白含量,最终获得具有饲料添加剂和禽畜用益生菌制剂双重功能的产品。该方法成本低廉、工艺简单、设备要求低。通过试验,得出以下结论:LAB单独发酵结果:在相同添加量的尿素、红糖、乳清粉和蔗糖的苹果渣培养基培养LAB,发现LAB在添加尿素和乳清粉时生长较好,在红糖和蔗糖中略差。再在尿素和乳清粉的不同添加量分别培养LA、LB和ST,每24h测其菌数和pH值,结果显示:LA在添加1%%乳清粉时生长最好,,;%,%时菌体形态良好,×108个/mE,;ST在添加2%%乳清粉时生长最好,球菌形成的链较长,,。不同乳酸菌混合发酵结果:采取前期试验配方苹果渣:蒸馏水=1:10,尿素2%,%。将LA、LB、ST按菌种比例1:1:1、1:1:2、1:2:1、1:2:2、2:2:1,接种总量5%,分别在37℃、39℃、41℃下培养,每24h测菌数和pH值。结果表明:在37℃,1:1:2菌数最大,,,镜检杆菌明显占优势;在39℃,1:2:1,,pH变化趋势一致,球杆菌分布较好;在41℃,1:1:2时菌数最大,,pH变化趋势相近,镜检结果与39。C相近。再对上述较好的三组合进行比较试验,以活菌数为评价标准。.结果显示:活菌数无明显差异,但39℃,1:2:1时杆菌数与球菌数分布较均匀。酵母菌发酵:以添加相同浓度的尿素、红糖、乳清粉和蔗糖的果渣做为苹果渣培养基,28。C培养酵母。显示:酵母菌在添加尿素和蔗糖培养基中生长较好,乳清粉中次之,红糖略差。再在不同尿素添加量下培养,每24h测其菌数和pH值,结果显示:在2%尿素菌体生长最好,发酵液上层有明显的乳白色物聚集,发酵味馥郁,且菌体形态较好,,。为给后期和乳酸菌混合发酵提供温度参数,再用该培养基不同温度培养酵母,测定活菌数。结果显示:30,---,36。C,菌数增长明显,都可迅速达108个/mL,在30℃,×108个/mE。酵母菌和乳酸菌混合发酵:将LA、LB、ST和Y四菌接入灭菌培养基,接种总量6%,接种比例为1:1:1:1、1:1:l:2、l:1:1:3、1:1:1:4、1:l:1:5和1:l:1:6,在不同温度(33℃、35℃、37℃、39℃)培养,每24h测其活菌数和pH值,结果显示:在33"'39℃,经一定时间,各温度不同比例的活菌数都可达108个/mE,在35℃,1:1:1:6的活菌数最高,;37℃,1:l:1:×108个/mE;在39℃下,1:1:1:2时活菌数最高,。发酵结束,。镜检发现酵母菌生长较少,乳酸菌明显占优势。,采用响应面分析法对工艺进行优化。结果显示:发酵温度36℃、菌种比例1:l:1:4、,定为最佳条件。验证试验:无论是干渣还是鲜渣,在最佳条件下进行验证,活菌数彼此极为相近,,。其他益生菌发酵:直接采用前期确定的培养基,5%接种量,分别在28℃和37℃培养曲霉和枯草芽孢杆菌。结果显示:枯草芽孢杆菌在其上生长良好,;曲霉不仅可以在该培养基上进行繁殖,而且生长时间同在最适培养基中生长的周期(7d)相近,说明用该培养基培养枯草芽孢杆菌和曲霉菌可行。菌剂制备及指标测定:采用前期试验各最佳条件培养,试制菌剂,并测定各指标。结果:%,%,%;;28。×107个/mE、37℃。关键字:益生菌,苹果渣,菌制剂,活菌数THESTUDYoNPR